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(Referência obtida automaticamente do Web of Science, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores.)

Aqueous Biphasic Systems Composed of Cholinium Chloride and Polymers as Effective Platforms for the Purification of Recombinant Green Fluorescent Protein

Texto completo
Autor(es):
dos Santos, Nathalia V. [1] ; Martins, Margarida [2] ; Santos-Ebinuma, Valeria C. [1] ; Ventura, Sonia P. M. [2] ; Coutinho, Joao A. P. [2] ; Valentini, Sandro R. [3] ; Pereira, Jorge F. B. [1]
Número total de Autores: 7
Afiliação do(s) autor(es):
[1] Sao Paulo State Univ UNESP, Sch Pharmaceut Sci, Dept Bioproc & Biotechnol, Rodovia Araraquara Jau Km 01, BR-14800903 Araraquara, SP - Brazil
[2] Univ Aveiro, Dept Chem, CICECO Aveiro Inst Mat, P-3810193 Aveiro - Portugal
[3] Sao Paulo State Univ UNESP, Sch Pharmaceut Sci, Dept Biol Sci, Rodovia Araraquara Jau Km 01, BR-14800903 Araraquara, SP - Brazil
Número total de Afiliações: 3
Tipo de documento: Artigo Científico
Fonte: ACS SUSTAINABLE CHEMISTRY & ENGINEERING; v. 6, n. 7, p. 9383-9393, JUL 2018.
Citações Web of Science: 3
Resumo

Green fluorescent protein (GFP) has excellent properties as a biosensor and biomarker; however, its widespread use is limited by its purification costs. Alternative low-cost purification techniques can overcome this issue. The aim of this work was to evaluate aqueous biphasic systems (ABS) composed of cholinium chloride ({[}Ch]Cl) and different polymers as effective platforms to recover GFP from cell lysate of recombinant Escherichia coli BL21. All systems completely extracted GFP from cell lysate (>99%) into the polymeric- or {[}Ch]Cl-rich phases. In general, {[}Ch]Cl-based ABS allowed a good purification capacity (GFP 80-100% pure), with the best results (approximately 100% pure GFP) achieved with a polypropylene glycol (PPG)-400/{[}Ch]Cl ABS in a single-step extraction or in a two-step extraction (back-extraction) by the integration of a polyethylene glycol (PEG)/sodium polyacrylate+{[}Ch]Cl ABS with a following stage using a PEG/{[}Ch]Cl-based ABS. Additionally, to demonstrate the potential of the PPG-400/{[}Ch]Cl ABS in downstream processing, solvent recycling and GFP polishing were carried out using ultrafiltration. Finally, the capacity of the PPG-400/{[}Ch]Cl ABS to extract other fluorescent proteins was also confirmed. The results clearly demonstrated that the PPG-400/{[}Ch]Cl ABS can be applied in downstream processing for the purification of proteins, not only enhancing purification yields but also providing simpler, quicker, cost-effective, and biocompatible processes. (AU)

Processo FAPESP: 14/16424-7 - Otimização e aumento de escala do processo de extração líquido-líquido com líquidos iônicos (LIs) como ferramenta de separação sustentável do biofármaco antileucêmico L-asparaginase (ASPase)
Beneficiário:Jorge Fernando Brandão Pereira
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Apoio a Jovens Pesquisadores
Processo FAPESP: 14/19793-3 - Otimização e aumento de escala de processos com líquidos iônicos como nova ferramenta de purificação da proteína verde fluorescente recombinante produzida por Escherichia coli "GFPurIL"
Beneficiário:Sandro Roberto Valentini
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo FAPESP: 16/07529-5 - Desenvolvimento de processos de purificação líquido-líquido e incorporação em matriz polimérica nanoestruturada da proteína verde fluorescente recombinante produzida por Escherichia coli
Beneficiário:Nathalia Vieira dos Santos
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto