Otimização e aumento de escala de processos com líquidos iônicos como nova ferramenta de purificação da proteína verde fluorescente recombinante produzida por Escherichia coli "GFPurIL"

• Processo: 14/19793-3
• Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de agosto de 2015 - 31 de janeiro de 2019
• Área do conhecimento: Engenharias - Engenharia Química - Tecnologia Química
• Convênio/Acordo: Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT)
• Pesquisador responsável: Sandro Roberto Valentini
• Beneficiário: Sandro Roberto Valentini
• Pesq. responsável no exterior: João Manuel da Costa e Araújo Pereira Coutinho
• Instituição no exterior: Universidade de Aveiro (UA), Portugal
• Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Pesq. associados: Adalberto Pessoa Junior ; Jorge Fernando Brandão Pereira ; Mara Guadalupe Freire Martins ; Sónia Patrícia Marques Ventura ; Valéria de Carvalho Santos Ebinuma
• Assunto(s): Extração líquido-líquido Purificação Líquidos iônicos Biomarcadores Proteínas de fluorescência verde Purificação de proteínas Escherichia coli

Resumo

As indústrias Farmacêutica e Biotecnológica têm como novos desafios a utilização de proteínas como terapêuticas inovadoras e vitais para o tratamento de doenças bastante complexas. Contudo, o controlo da sua produção e/ou identificação de sua aplicabilidade e eficácia requer um desenvolvimento de novas biomarcadores e bionsensores. Desse modo, a facilidade deteção da Proteína Verde Fluorescente (GFP) levou a que a mesma se tenha tornado um dos biomarcadores biológicos mais promissores. Contudo, tal como as outras proteínas/enzimas produzidas por microorganismos, a sua produção e purificação é bastante complexa e extremamente dispendiosa, o que limita uma larga utilização da GFP. Assim, este projeto propõe como metodologia alternativa e mais sustentável o uso de Sistemas de Duas Fases Aquosas com Líquidos Iônicos (IL-ATPS) na purificação e isolamento da GFP recombinante produzida por Escherichia coli. De forma a atingir este objectivo, este projeto irá começar com a expressão e produção da GFP, e posteriormente a optimização da sua purificação a partir dos meios fermentados utilizando quatro abordagens diferentes de IL-ATPS. Então, será realizado o respetivo aumento de escala dos sistemas de purificação optimizados em escala laboratorial para uma escala piloto. Sumariando, com este projeto pretende-se desenvolver e estudar a aplicabilidade industrial de uma nova tecnologia de downstream para a produção de GFP, a qual poderá ser depois aplicada para outras proteínas e bioprodutos de valor acrescentado. (AU)

Publicações científicas

(7)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

DOS SANTOS, NATHALIA VIEIRA; SAPONI, CAROLINA FALASCHI; GREAVES, TAMAR LOUISE; BRANDAO PEREIRA, JORGE FERNANDO. Revealing a new fluorescence peak of the enhanced green fluorescent protein using three-dimensional fluorescence spectroscopy. RSC ADVANCES, v. 9, n. 40, p. 22853-22858, AUG 1 2019. Citações Web of Science: 0.

RODRIGUES TEIXEIRA-PINTO, RENATA GARCIA; MOLINO, JOAO VITOR DUTRA; SANTOS-EBINUMA, VALERIA CARVALHO; PESSOA, JR., ADALBERTO; VALENTINI, SANDRO ROBERTO; BRANDAO PEREIRA, JORGE FERNANDO; LOPES, ANDRE MORENI. Effect of electrolytes as adjuvants in GFP and LPS partitioning on aqueous two-phase systems: 2. Nonionic micellar systems. Separation and Purification Technology, v. 210, p. 69-79, FEB 8 2019. Citações Web of Science: 0.

MUSSAGY, CASSAMO USSEMANE; WINTERBURN, JAMES; SANTOS-EBINUMA, VALERIA CARVALHO; BRANDAO PEREIRA, JORGE FERNANDO. Production and extraction of carotenoids produced by microorganisms. Applied Microbiology and Biotechnology, v. 103, n. 3, p. 1095-1114, FEB 2019. Citações Web of Science: 3.

LOPES, ANDRE MORENI; DUTRA MOLINO, JOAO VITOR; DOS SANTOS-EBINUMA, VALERIA CARVALHO; PESSOA, JR., ADALBERTO; VALENTINI, SANDRO ROBERTO; BRANDAO PEREIRA, JORGE FERNANDO. Effect of electrolytes as adjuvants in GFP and LPS partitioning on aqueous two-phase systems: 1. Polymer-polymer systems. Separation and Purification Technology, v. 206, p. 39-49, NOV 29 2018. Citações Web of Science: 3.

DOS SANTOS, NATHALIA V.; MARTINS, MARGARIDA; SANTOS-EBINUMA, VALERIA C.; VENTURA, SONIA P. M.; COUTINHO, JOAO A. P.; VALENTINI, SANDRO R.; PEREIRA, JORGE F. B. Aqueous Biphasic Systems Composed of Cholinium Chloride and Polymers as Effective Platforms for the Purification of Recombinant Green Fluorescent Protein. ACS SUSTAINABLE CHEMISTRY & ENGINEERING, v. 6, n. 7, p. 9383-9393, JUL 2018. Citações Web of Science: 3.

DOS SANTOS, NATHALIA VIEIRA; SANTOS-EBINUMA, VALERIA DE CARVALHO; PESSOA JUNIOR, ADALBERTO; BRANDAO PEREIRA, JORGE FERNANDO. Liquid-liquid extraction of biopharmaceuticals from fermented broth: trends and future prospects. JOURNAL OF CHEMICAL TECHNOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, v. 93, n. 7, SI, p. 1845-1863, JUL 2018. Citações Web of Science: 5.

NEVES, CATARINA M. S. S.; SHAHRIARI, SHAHLA; LEMUS, JESUS; PEREIRA, JORGE F. B.; FREIRE, MARA G.; COUTINHO, JOAO A. P. Aqueous biphasic systems composed of ionic liquids and polypropylene glycol: insights into their liquid-liquid demixing mechanisms. Physical Chemistry Chemical Physics, v. 18, n. 30, p. 20571-20582, AUG 14 2016. Citações Web of Science: 17.