Remoção de endotoxina presente em meio fermentado contendo biomoléculas utilizando sistemas micelares de duas fases aquosas

Resumo

Em indústria biotecnológica é freqüente a utilização de bactérias como hospedeiros para obtenção de proteínas recombinantes de interesse farmacêutico. Assim, faz-se necessária a remoção de endotoxinas das preparações resultantes sem a desnaturação protéica. O projeto visa o estudo da utilização de sistemas micelares de duas fases aquosas para remoção de endotoxinas de preparações contendo proteínas. Esse sistema proporciona uma ambiente favorável às biomoléculas e possibilidade de remoção das endotoxinas, que são moléculas lipopolissacarídicas com caráter anfifílico semelhantemente aos tensoativos. Será estudada a partição de endotoxina, obtida de cultivo de cepa recombinante de Escherichia coli DH5-a, em sistema micelar constituído pelo tensoativo Triton X-114. Será estudada a influência do efeito de volume de exclusão e da formação de domínios de uma fase na outra na partição da endotoxina. Os ensaios de partição serão realizados inicialmente com a endotoxina pura e, em seqüência, na presença da proteína verde fluorescente recombinante (GFPuv), a qual vem sendo estudada como potencial indicador biológico e é produzida por E. coli DH5-ã Para a realização deste estudo, será necessária a implementação de técnica no laboratório de quantificação de endotoxinas. Além disto, a influência da endotoxina na curva binodal do sistema micelar, bem como a influência do tensoativo na metodologia de determinação de endotoxina, serão avaliadas. (AU)