Busca avançada
Ano de início
Entree
(Referência obtida automaticamente do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores.)

CLONAGEM, EXPRESSÃO E CARACTERIZAÇÃO DA NUCLEOPROTEÍNA RECOMBINANTE DO VÍRUS DA BRONQUITE INFECCIOSA EM ESCHERICHIA COLI E EM PICHIA PASTORIS

Texto completo
Autor(es):
A.M. Gibertoni [1] ; M.C.M. Gonçalves [2] ; M.F.S. Montassier [3] ; C.C. Fernandes [4] ; H.J. Montassier [5]
Número total de Autores: 5
Afiliação do(s) autor(es):
[1] Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias. Departamento de Patologia Veterinária - Brasil
[2] Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias. Departamento de Patologia Veterinária - Brasil
[3] Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias. Departamento de Patologia Veterinária - Brasil
[4] Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias. Departamento de Patologia Veterinária - Brasil
[5] Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias. Departamento de Patologia Veterinária - Brasil
Número total de Afiliações: 5
Tipo de documento: Artigo Científico
Fonte: Arq. Inst. Biol.; v. 77, n. 1, p. 1-9, 2020-10-19.
Resumo

RESUMO O gene da proteína de nucleocapsídeo (1.230 pb) da estirpe M41 do vírus da bronquite infecciosa (VBI) foi amplificado pelas reações de transcrição reversa e em cadeia da polimerase (RT-PCR) e clonado, em seguida, em dois sistemas; pET28a - Escherichia coli e pFLD -Pichia pastoris. Os produtos recombinantes construídos para expressão (pET28a-N ou pFLD-N) foram identificados por análises de PCR e de sequenciamento de nucleotídeos. Os clones transformantes da linhagem BL21 de E. coli e da linhagem GS115 de P. pastoris foram submetidos aos protocolos apropriados de indução. A expressão da proteína N de fusão com etiqueta de poli-histidina e com massa molecular de 54 kDa foi determinada pelas técnicas de SDS-PAGE e de Western blotting, confirmando-se que ambas proteínas N recombinantes apresentaram tamanhos e antigenicidade compatíveis com a proteína N nativa do próprio VBI. O sistema E. coli expressou uma quantidade relevante da proteína N recombinante, enquanto que o sistema P. pastoris produziu uma baixa recuperação dessa proteína recombinante. A proteína N recombinante gerada pelo sistema bacteriano foi purificada em resina de níquel-sepharose. O conjunto de resultados indica que o sistema de expressão constituído por pET28a – E. coli é mais efetivo para produzir a proteína N recombinante do VBI destinada ao uso como antígeno para detectar anticorpos anti-virais específicos em ensaios de imunodiagnóstico para essa infecção viral. (AU)

Processo FAPESP: 05/54275-4 - Clonagem e expressão da nucleoproteína do vírus da bronquite infecciosa em sistemas hospedeiros eucarióticos (Pichia pastoris) e procarióticos (Escherichia coli)
Beneficiário:Aliandra Maura Gibertoni Malaman
Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado