Comparação das técnicas de cultivo de células epiteliais da córnea para a coleta de meio condicionado

Autor(es)

Magda Massae Hata Viveiros ^[1] ; Luís Henrique Zucoloto ^[2] ; Álvio Issao Shiguematsu ^[3] ; Cláudia Aparecida Rainho ^[4] ; Silvana Artioli Schellini ^[5]

Afiliação do(s) autor(es)

^[1] Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho,”. Faculdade de Medicina de Botucatu. Department of Ophthalmology - Brasil

^[2] Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho,”. Faculdade de Medicina de Botucatu - Brasil

^[3] Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho,”. Faculdade de Medicina de Botucatu. Department of Ophthalmology - Brasil

^[4] Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”. Instituto de Biociências de Botucatu. Department of Chemical and Biological Sciences - Brasil

^[5] Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho,”. Faculdade de Medicina de Botucatu. Department of Ophthalmology - Brasil

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: Arquivos Brasileiros de Oftalmologia; v. 87, n. 2 2024-04-22.

Resumo

RESUMO Objetivos: Foram estudadas cinco técnicas de cultivo primário de células epiteliais de córnea humana para se determinar o melhor protocolo para a obtenção do maior rendimento de meio de cultivo condicionado para ser utilizado na diferenciação de células tronco mesenquimais para células epiteliais de córnea. Métodos: As técnicas de cultivo estudadas foram: explantes em frascos de cultivo com e sem tratamento hidrofílico de superfície, sobre membrana amniótica, com digestão enzimática e por raspado de córnea. O meio de cultivo condicionado foi coletado e as células tronco mesenquimais induzidas a se diferenciarem em células epiteliais da córnea utilizando o meio de cultivo condicionado. As células foram caracterizadas por citometria de fluxo com pan-citoqueratina e com os marcadores específicos da córnea, citoqueratina 3 e citoqueratina 12. Resultados: A técnica utilizando frascos com o tratamento de superfície apresentou o maior rendimento de meio de cultivo condicionado. Os frascos sem tratamento de superfície levaram a uma taxa de sucesso muito baixa. A digestão enzimática e a raspagem da córnea mostraram contaminação das culturas com fibroblastos de córnea. A cultura sobre membranas amnióticas só permitiu a coleta do meio de cultivo condicionado durante a 1ª confluência celular. A análise de citometria de fluxo confirmou o sucesso da diferenciação celular utilizando o meio de cultivo condicionado coletado, demonstrada pela expressão de citoqueratina 3 (95,3%), citoqueratina 12 (93,4%) e pan-citoqueratina (95,3%). Conclusão: O cultivo de explantes de células tronco mesenquimais em frascos com tratamento hidrofílico de superfície é a melhor técnica para a obtenção de um alto rendimento de meio de cultivo condicionado. (AU)

• Processo FAPESP: 15/10727-0 - Cultivo de células tronco mesenquimais de medula óssea humana sobre scaffolds de Nanoskin para a reconstrução da superfície ocular.
• Beneficiário: Silvana Artioli Schellini
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular