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Precipitation of non-therapeutic monoclonal antibodies with polyethylene glycol and zinc chloride: challenges and remarks from precipitation to resolubilization step

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Autor(es):
Passaro, Ana Carolina Moreno ; de Souza, Maria Paula Orban ; Leite, Amanda Calil Barcellos ; Almeida, Caio Nadalucci ; Bresolin, Iara Rocha Antunes Pereira ; Bresolin, Igor Tadeu Lazzarotto
Número total de Autores: 6
Tipo de documento: Artigo Científico
Fonte: Chemical Engineering Communications; v. 211, n. 10, p. 15-pg., 2024-06-13.
Resumo

Monoclonal antibodies (mAbs) have become fundamental across various sectors, with growing demands in both therapeutic and non-therapeutic applications. For the antibodies capture step, precipitation stands out as an alternative or precursor method to chromatographic techniques. However, research on unconventional precipitants, such as polyethylene glycol (PEG) and ZnCl2, for diluted non-therapeutic mAbs is still scarce. This study evaluates the potential and challenges of combining PEG 6000 kDA and ZnCl2 as precipitants to capture anti-human IgG1 mAbs from highly diluted cell culture supernatants. We established mAbs solubility curves, identified optimal conditions for batch precipitation, fine-tuned the resolubilization step and conducted a viscosity analysis for the precipitates. We achieved 100% yield and 59% purity for the redissolution step, after using a 12% PEG 6000/3 mmol L-1 ZnCl2 precipitation condition with a 1:1 dilution ratio at pH 6.0 for resolubilization. Nevertheless, results also indicate that the resolubilization step potentially leads to mAb fragmentation and that protein aggregates might impact mAb viscosity and flow behavior. In conclusion, the combination of these agents is promising for mAbs capture, however, pre-concentration techniques are advised for severely diluted systems and caution toward ZnCl2 is recommended, especially concerning the pH of the system and ZnCl2 concentration. (AU)

Processo FAPESP: 22/15751-0 - Avaliação da precipitação como técnica de recuperação e purificação de anticorpos policlonais anti-IgM humana a partir de soro de coelhos
Beneficiário:Caio Nadalucci Almeida
Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Processo FAPESP: 22/03417-9 - Avaliação da precipitação como técnica de recuperação e purificação de anticorpos policlonais anti-IgM humana a partir de soro de coelhos
Beneficiário:Maria Paula Orban de Souza
Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Processo FAPESP: 20/12552-1 - Precipitação como método de purificação de anticorpos monoclonais e policlonais: determinação de parâmetros termodinâmicos e de processo
Beneficiário:Igor Tadeu Lazzarotto Bresolin
Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo FAPESP: 20/06538-6 - PURIFICAÇÃO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS QUE RECONHECEM PROTEÍNAS SARS-CoV-2 VIA PRECIPITAÇÃO COM POLIETILENOGLICOL
Beneficiário:Maria Paula Orban de Souza
Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo FAPESP: 19/08975-7 - EMU concedido no processo 2018/15539-6: reômetro modular compacto e acessórios
Beneficiário:Fabiana Perrechil Bonsanto
Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Programa Equipamentos Multiusuários
Processo FAPESP: 22/02807-8 - Produção de anticorpos monoclonais anti-IgG humana e sua purificação com precipitação
Beneficiário:Ana Carolina Moreno Pássaro
Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Processo FAPESP: 22/07322-2 - Quantificação de anticorpos em colunas de afinidade com proteínas A e G: Avaliação dos efeitos da viscosidade no desempenho dos métodos analíticos
Beneficiário:Amanda Calil Barcellos Leite
Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica