Osteogênese in vitro e in vivo em amostras de titânio, com diferentes porosidades, submetidas ao tratamento biomimético

Resumo

O objetivo deste estudo será avaliar a influência da porosidade e do tamanho dos poros, bem como do tratamento biomimético, na osteogênese in vitro e in vivo em espécimes de titânio. Serão confeccionados por metalurgia do pó 180 espécimes de titânio puro grau 2, que serão divididos em seis grupos: a) grupo 1: controle - titânio usinado; b) grupo 2: 30% de porosidade e poros com 300µm; c) grupo 3: 40% de porosidade e poros com 300µm; d) grupo 4: amostras do G1 submetidas ao tratamento biomimético (TB); e) grupo 5: amostras do G2 submetidas ao TB; f) grupo 6: amostras do G3 submetidas ao TB. Inicialmente, a superfície de 05 espécimes de cada grupo será caracterizada por meio de análise metalográfica, visando confirmar a quantidade, área, morfologia e interligação dos poros. Cinco espécimes com TB, também serão submetidos a espectrometria por dispersão de energia (EDS) e à espectroscopia Raman, para identificar os elementos químicos presentes. Na etapa in vitro deste estudo, células osteogênicas obtidas da calvária de ratos recém-nascidos serão cultivadas sobre 15 amostras de cada grupo e avaliadas quanto a adesão após 24 horas, a proliferação após 3, 7 e 10 dias e a viabilidade celular, que será detectada pelo azul de Trypan. Serão mensurados também o conteúdo de proteína total e a atividade de fosfatase alcalina aos 4, 7, 14 e 21 dias e a quantificação de formações nodulares de matriz mineralizada será realizada aos 7, 10, 14 dias utilizando vermelho de Alizarina S a 2%.A morfologia celular do citoesqueleto de actina e do núcleo será observada por fluorescência direta. Na etapa in vivo, serão utilizados quinze coelhos para avaliar a reparação do tecido ósseo ao redor dos implantes de titânio, por meio de análise histológica e histomorfométrica. Cada coelho receberá 1 implante de cada grupo, sendo que os implantes G1, G2, G3 serão inseridos na tíbia direita e G4, G5 e G6 na tíbia esquerda. Cinco coelhos, selecionados aleatoriamente, serão sacrificados 04, 08 e 12 semanas após a cirurgia. Os dados da análise metalográfica serão submetidos ao teste de Kruskal-Wallis e Dunn. Os dados dos experimentos com cultura celular serão comparados usando o teste não paramétrico de Mann-Whitney e t-Student. A análise histomorfométrica será avaliada pelo teste estatístico ANOVA e teste de Tukey (p<0,05). (AU)