Influência de inibidores de síntese e absorção de colesterol na expressão de proteínas do transporte reverso do colesterol em células HepG2 e CACO-2

Resumo

Os inibidores de síntese (estatinas) e absorção intestinal (ezetimiba) do colesterol são potentes fármacos hipocolesterolemiantes que diminuem o risco de eventos coronarianos, principalmente pela redução do colesterol da lipoproteína de baixa densidade (LDL) no plasma. As estatinas também podem alterar a concentração do colesterol da lipoproteína de alta densidade (HDL), reconhecida como ateroprotetora, principalmente por seu papel no transporte reverso do colesterol (TRC). Entretanto, a resposta do colesterol da HDL ao tratamento com estatinas é bastante variável. Portanto é de interesse conhecer os mecanismos de regulação de proteínas envolvidas no TRC, como ATP-binding cassette transporter A1 e G1 (ABCA1 e ABCG1), apolipoproteína E (ApoE) e scavenger receptor BI (SRBI), mediados por hipolipemiantes. O objetivo deste estudo é investigar os efeitos de estatinas e ezetimiba sobre a expressão de ABCA1, ABCG1, ApoE e SRBI, em linhagens celulares de hepatocitos (HepG2) e enterócitos (Caco-2) humanos. As células serão incubadas com diferentes concentrações de hipolipemiantes para avaliação da viabilidade e fragmentação celular por microscopia e citometria de fluxo. A expressão de mRNA de ABCA1, ABCG1, ApoE e SRBI será avaliada por PCR em tempo real quantitativo (PCRq) e a expressão de proteinas por Western blotting e citometria de fluxo. A atividade de fatores de transcrição envolvidos na regulação desses genes, como LXR±, LXR² e SREBP2, será realizada por ensaio de mobilidade eletroforética retardada em gel de poliacrilamida (EMSA) que permite estudar as interações DNA-proteinas. Os efeitos de hipolipemiantes sobre a estabilidade dos transcritos serão medido por PCRq. Os resultados deste estudo contribuirão para o conhecimento dos mecanismos envolvidos na modulação da expressão de proteinas do TRC por hipolipemiantes. Esse conhecimento poderá auxiliar no desenvolvimento de novas estratégias farmacológicas que visem o incremento quanti e qualitativo da HDL no plasma e a redução de eventos coronarianos em pacientes com risco cardiovascular. (AU)