Efeito do diabete moderado na matriz extracelular e no músculo estriado uretral em ratas prenhes

Resumo

Diabetes mellitus durante a gestação está associado com altos níveis de incontinência urinária e disfunção muscular do assoalho pélvico. Em trabalho experimental, nosso grupo de estudo encontrou diversos efeitos do diabete grave na musculatura estriada uretral em ratas prenhes, entre eles: atrofia, adelgaçamento e mudança na distribuição e no tipo de fibra muscular. Neste projeto, abordaremos o modelo experimental de ratas prenhes com diabete de menor intensidade glicêmica (glicemia entre 120 e 300 mg/dL), denominado diabete moderado, a fim de se estabelecer uma maior correlação com os níveis glicêmicos encontrados na clínica. Sendo assim, será realizado um estudo mais aprofundado em relação a trabalhos prévios utilizando para isso análise estrutural e ultraestrutural da matriz extracelular e do músculo estriado uretral de ratas. Serão avaliadas 92 ratas Wistar distribuídas em quatro grupos: virgem, prenhe, diabético virgem e diabético prenhe. Os três primeiros grupos serão considerados como controle do grupo principal, o diabético prenhe. O diabete moderado será induzido no 1º dia de nascimento por administração subcutânea de streptozotocin (SIGMA Chemical Company, St. Louis, MO), na dose de 100 mg/kg de peso corporal diluído em 0,1 mol/l de tampão citrato (pH 4,5). O critério de inclusão será uma glicemia entre 120 e 300 mg/dL. No final do experimento, as ratas serão anestesiadas, eutanasiadas e a vagina e a uretra serão retiradas em monobloco, congeladas em nitrogênio líquido e mantidas a -80°C. O bloco será submetido a cortes em criostato (6 µm de espessura) e serão então submetidos às colorações citoquímicas para componentes da matriz extracelular; imunoistoquímica para marcação de fibras lentas e rápidas e microscopia eletrônica de transmissão para análise da musculatura estriada uretral. Serão feitas análises morfométricas de espessura da camada muscular, espessura da camada de lâmina própria e da área de tecido conjuntivo ao redor do músculo estriado uretral dos quatro grupos. A nossa hipótese é que, no binômio diabete e prenhez, a análise conjunta do músculo estriado uretral e da matriz extracelular evidencie que a alteração da composição deste músculo induz à remodelação tecidual na qual a matriz assume papel fundamental. Além disso, espera-se compreender melhor os efeitos estruturais e ultraestruturais da interação diabete e prenhez sobre a matriz extracelular e sobre o músculo estriado uretral, além de verificar se o diabete moderado (glicemia entre 120-300mg/dL) acarreta alterações musculares similares às que foram encontradas no diabete grave (glicemia >300mg/dL).