BnMP2-III, uma nova meteloproteinase do veneno de Bothrops neuwiedi:Obtenção na forma recombinante e ação na hemostasia

Resumo

As metaloproteinases de venenos de serpentes (SVMPs) são enzimas altamente versáteis, responsáveis por grande parte dos sintomas do envenenamento. Sua ação está relacionada com a proteólise dos componentes da matriz extracelular, ativação ou hidrólise de componentes da cascata de coagulação e fibrinólise, inibição da agregação plaquetária, indução de hemorragia local e sistêmica, atividade pró-inflamatória, entre outras. Essa ampla gama de atividades biológicas está relacionada com a diversidade estrutural dessa família de proteínas. Para melhor entender a diversidade estrutural e funcional das SVMPs, seqüenciamos os cDNAs da glândula de veneno Bothrops neuwiedi que codificam SVMPs. Foram encontradas novas SVMPs, distintas das descritas em venenos de outras espécies. Nosso objetivo neste projeto é caracterizar o papel da BnMP2-III nas alterações da hemostasia induzida pelo veneno. Esta proteína apresentou uma sequência bastante peculiar com a fusão de um domínio catalítico de SVMPs pró-coagulantes da classe P-III com um domínio RGD-disintegrina, de SVMPs classe P-II, com a inclusão de cisteínas não descritas anteriormente. Para analisar a atividade dessa proteína, obteremos sua forma recombinante completa, e de seus domínios independentes, em sistemas eucariotos e procariotos. As proteínas recombinantes serão testadas quanto às principais ações de SVMPs classe P-II e P-III nos componentes de coagulação, matriz extracelular, plaquetas e microcirculação. Pretendemos com isso avançar no conhecimento da ação de SVMPs na patologia dos envenenamentos e eventualmente caracterizar novas ferramentas biológicas de importância terapêutica.