Montagem de um sistema de expressão e purificação heteróloga do fator de transcrição induzido por hipóxia HIF-1 humano visando estudos estruturais e bioquímicos.

Resumo

A adaptação das células cancerosas ao microambiente é o ponto central do processo de seleção clonal que leva ao fenótipo invasivo e metastático, e é garantida principalmente através do controle preciso da expressão gênica. A importante resposta às necessidades energéticas e biosintéticas e principalmente à disponibilidade de oxigênio intracelular, por exemplo, é mediada pelo fator de transcrição induzido por hipóxia 1 (HIF-1). HIF-1 é um heterodímero composto pelas subunidades ± e ², que ativa a transcrição de mais de 100 genes envolvidos em diversos aspectos cruciais da biologia tumoral, incluindo angiogênese, sobrevivência celular e resistência a radio e quimioterapias, e principalmente, o metabolismo de glicose. Baseado em extensivos dados clínicos, a presença de HIF-1 têm sido associada com um mau prognóstico da doença e a altos níveis de mortalidade de pacientes de câncer. No decorrer da última década, vários estudos têm sido publicados descrevendo as bases celulares deste processo, porém grande parte dos mecanismos estruturais e funcionais associados permanece elusiva. Dentro desse contexto, o projeto proposto objetiva a implantação de um sistema de expressão heteróloga visando a determinação da estrutura cristalográfica do heterodímero da HIF-1, juntamente com estudos estruturais adicionais desta proteína com alguns de seus parceiros de interação e com seu elemento responsivo HRE. O trabalho pretenderá ainda descrever os mecanismos de ação destas moléculas através do uso de ferramentas biofísicas e espectroscópicas apropriadas.