Identificação e caracterização das origens de replicação em Trypanosoma e Leishmania

Resumo

A precisa iniciação da replicação garante a sintese de um genoma a cada ciclo celular. Para garantir este controle, a célula utiliza uma seqüência de nucleotídeos, onde a duplicação do DNA inicia-se, e um complexo protéico (complexo de pré-replicação-CPR) capaz de reconhecer esta região do DNA como uma origem de replicação. Em eucariotos CPR é composto por um heterohexâmero ORC formado por seis proteínas (Orc1 a Orc6), pelas proteínas Cdc6, Cdt1 e o heterohexâmero MCM (Mcm1-Mcm7). Este último apresenta atividade de helicase fundamental para o processo de replicação. Pouco se sabe sobre o processo de replicação em tripanossomatídeos, parasitas protozoários que divergiram muito cedo durante a evolução dos eucariotos. O grupo de pesquisa da Dra Maria Carolina Q. B. E. Sabbaga (Instituto Butantan) identificou que Trypanosoma cruzi e Trypanosoma brucei não apresentam as subunidades Orc1-Orc6, mas apresentam uma proteína com identidade a Orc1 e a Cdc6, denominada Orc1/Cdc6, homóloga a membros do domínio Archaea e apresentam características que as classificam como membros maquinaria de pré-replicação. Um estudo prévio em L. major também identificou apenas um ortólogo de ORC, Orc1. A proposta deste trabalho é buscar as seqüências de origens de replicação de T. cruzi, T. brucei e L. major, identificando as seqüências que interagem com Orc1/Cdc6. Além disto, tentar resolver a estrutura das Orc1/Cdc6s desses organismos, ligadas e não ligadas ao DNA alvo. Os dados obtidos destes estudos serão importantes tanto para ampliar o conhecimento da biologia destes tripanossomatídeos, como para abrir a possibilidade de buscar possíveis abordagens profiláticas ou terapêuticas para as doenças por eles causadas.