CDNA e lincRNA microarrays: identificação de padrões de expressão gênica relacionados à metastatização em carcinomas epidermóides orais

Resumo

O carcinoma epidermóide oral (CEO) é o principal tipo de neoplasia maligna da cavidade oral, respondendo por mais de 95% dos tumores desta região, e tem sido associado a um pior prognóstico e alta morbidade. Ainda não estão disponíveis estudos investigando o padrão de expressão gênica de células metastáticas presentes em linfonodos acometidos, bem como a expressão de lincRNAs em CEOs. A comparação entre os perfis gênicos, tanto de cDNAs quanto de lincRNAs encontrados em células do tumor primário e em células metastáticas pode fornecer novas informações sobre genes diferencialmente expressos entre estes dois tipos de células tumorais. Nosso objetivo é verificar a existência de diferenças de padrões de expressão gênica entre células tumorais no sítio primário e células metastáticas em linfonodos, a fim de identificar genes e lincRNAs que possam estar relacionados à invasão das células metastáticas. Para este estudo serão utilizados 10 amostras de tecido neoplásico de pacientes que foram submetidos à cirurgia para ressecção tumoral, e que tinham linfonodos acometidos no momento da diagnóstico, no Departamento de Cirurgia de Cabeça e Pescoço do Hospital do Câncer A.C. Camargo, e 10 amostras sem evidências de comprometimento neoplásico do Biobanco da mesma instituição. Através de microdissecção à laser (LCM) somente células tumorais serão isoladas dos linfonodos comprometidos. Serão utilizados microarranjos de cDNA (cDNA microarrays) e de lincRNAs (lincRNA microarrays), que serão hibridizados e comparados entre si e a arranjos de tecido normal. A identificação dos genes diferencialmente expressos se dará pela aplicação do teste estatístico para análise de microarrays SAM (Significance Analysis of Microarrays). Para confirmação da alteração na expressão gênica será utilizada a técnica de RT-PCR, para 10 genes diferencialmente expressos e para a análise de expressão proteica, a técnica de imuno-histoquímica em tissue microarrays. (AU)