Detecção do Paracoccidioides spp. em amostras ambientais e diferenciação do complexo P. brasiliensis da espécie P. lutzii por Nested PCR e hibridização in situ.

Resumo

O solo é o mais provável habitat do fungo patogênico Paracoccidioides sp., devido à detecção molecular deste patógeno neste tipo de amostra, associada à freqüente infecção de trabalhadores rurais e isolamento em animais silvestres (Dasypus novemcinctus, Cabassous centralis e Choloepus didactylus). Nos últimos anos a detecção molecular mostrou-se promissora no estudo ambiental deste agente, principalmente pelas técnicas da PCR e Nested PCR. O presente projeto visa detectar e diferenciar as espécies Paracoccidioides brasiliensis (complexo S1, PS2 e PS3) e Paracoccidioides lutzii no ambiente, pelas técnicas de Nested PCR e TSA-FISH, respectivamente, em amostras ambientais aerossóis e solo de tocas de tatus provenientes de áreas endêmicas para a Paracoccidioidomicose nas regiões Sudeste e Centro-Oeste brasileiras. A hibridização com sondas de oligonucleotídeos denominada FISH (Fluorescence in situ Hybridization) pode ser associada à técnica de TSA (Tyramide Signal Amplification), a qual amplifica o sinal emitido pela sonda fluorescente. Além da detecção ambiental de Paracoccidioides sp. por métodos moleculares, será estudada a ocorrência de tatus infectados com P. lutzii no centro-oeste brasileiro, região de maior prevalência desta espécie, onde nenhum animal foi avaliado até o presente momento. Uma vez que a atual distribuição geográfica de isolados do gênero Paracoccidioides é baseada principalmente em isolamentos de amostras clínicas e sofre interferência da migração dos hospedeiros, acreditamos que a proposta deste projeto apresenta grande potencial para um melhor entendimento da biogeografia de Paracoccidioides sp., já que a detecção do fungo será realizada diretamente em amostras ambientais.