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Clonagem e expressão da fosfolipase A2-CB do veneno da serpente Caudisona durissa terrificus e avaliação da sua atividade antidengue e antifebre amarela

Processo: 12/12605-1
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Data de Início da vigência: 01 de maio de 2013
Data de Término da vigência: 30 de junho de 2017
Área de conhecimento:Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
Pesquisador responsável:Victor Hugo Aquino Quintana
Beneficiário:Raquel Rinaldi Russo
Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Dengue   Febre amarela   Fosfolipases A2   Antivirais   Venenos de serpentes
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:antiviral | Crotalus durissus terrificus | Dengue | Febre amarela | Fosfolipase A2 | veneno de serpente | Virologia

Resumo

O vírus da dengue (DENV) e o da febre amarela (YFV) pertencem ao gênero Flavivirus, família Flaviviridae, e representam importantes arbovírus causadores de doença em humanos. Embora exista uma vacina contra o YFV, ainda são notificados muitos casos de febre amarela nas regiões endêmicas das Américas e, principalmente, da África. Não existem agentes terapêuticos para tratamento da infecção contra nenhum desses vírus. Portanto, estudos para identificação de fármacos para combaterem a dengue e a febre amarela são de suma importância. Nosso grupo descreveu recentemente a ação antiviral da fosfolipase A2 crotoxina B (PLA2-CB) da serpente Caudisona durissa terrificus, a qual tem ação nas fases iniciais do ciclo de replicação do YFV e do DENV. Este projeto tem como objetivo clonar e expressar as duas isoformas da PLA2-CB e avaliar a sua atividade anti-DENV e anti-YFV. As sequências que codificam as isoformas da PLA2-CB serão inseridas em um vetor plasmidial de expressão que será utilizado para transformar células E. coli competentes, as quais serão induzidas a expressar as proteínas recombinantes. Após confirmação e purificação, as isoformas recombinantes da PLA2-CB serão utilizadas em ensaios antivirais. A ação antiviral das PLA2s será avaliada in vitro pela técnica de placas de lise (inibição da replicação viral). A atividade antiviral será medida pelo cálculo do índice de seletividade (IS), que é a razão entre os valores da concentração citotóxica a 50% da monocamada celular (CC50) e a concentração que inibe 50% da infecção viral (CE50). A fim de identificar quais os sítios da molécula da PLA2-CB estão diretamente envolvidos na sua atividade antiviral, mutagêneses sítio-dirigidas serão realizadas. (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
RUSSO, RAQUEL RINALDI; DOS SANTOS JUNIOR, NILTON NASCIMENTO; OLIVEIRA CINTRA, ADELIA CRISTINA; MORAES FIGUEIREDO, LUIZ TADEU; SAMPAIO, SUELY VILELA; AQUINO, VICTOR HUGO. Expression, purification and virucidal activity of two recombinant isoforms of phospholipase A(2) from Crotalus durissus terrificus venom. ARCHIVES OF VIROLOGY, v. 164, n. 4, p. 1159-1171, . (14/02438-6, 12/12605-1)
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
RUSSO, Raquel Rinaldi. Produção e atividade antiviral das isoformas da fosfolipase A2 crotoxina B recombinante. 2017. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (PCARP/BC) Ribeirão Preto.

Patente(s) depositada(s) como resultado deste projeto de pesquisa

PROCESSO DE OBTENÇÃO DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES CB1-6XHIS_OPT E CB2-6XHIS_OPT, PROTEÍNAS RECOMBINANTES CB1-6XHIS_OPT E CB2-6XHIS_OPT E USO DAS PROTEÍNAS RECOMBINANTES BR1020170216276 - Universidade de São Paulo (USP) . VICTOR HUGO AQUINO QUINTANA / ADELIA CRISTINA OLIVEIRA CINTRA / LUIZ TADEU MORAES FIGUEIREDO / RAQUEL RINALDI RUSSO / SUELY VILELA SAMPAIO - 09 de outubro de 2017