O papel da melatonina exógena no meio de maturação in vitro de oócitos bovino e suíno: determinação e quantificação dos principais metabólitos por espectrometria de massas

Resumo

O desenvolvimento de novas tecnologias na produção animal, assim como o conhecimento dos sistemas biológicos, são pesquisas relevantes para o progresso das biotecnologias do setor agropecuário no Brasil. Nesta atividade econômica, a área de reprodução animal tem especial interesse devido ao seu impacto na produção animal. Neste projeto, propomos a análise do perfil metabolômico da melatonina exógena e de seus possíveis metabólitos gerados em meio de maturação in vitro em oócitos da espécie bovina e suína, utilizando para tal o desenvolvimento, validação e aplicação de uma metodologia analítica de alta confiabilidade baseada em cromatografia líquida e espectrometria de massas sequencial (HPLC-MS/MS). A melatonina é um hormônio de significativa importância biológica, mas com funções pouco elucidadas no desenvolvimento oocitário e embrionário de bovinos e suínos. O método de HPLC-MS/MS desenvolvido será aplicado também na análise comparativa entre as amostras de fluído folicular obtidas das mesmas espécies e em diferentes fases do desenvolvimento, de forma a elucidar o papel da melatonina na competência oocitária e confirmar a faixa fisiológica desses metabólitos. Estudos apresentados na literatura mostram que a maturação in vitro pode ser prejudicada por estresse oxidativo causado por espécies reativas de oxigênio, frente às quais a melatonina pode apresentar efeito inativante. Resultados prévios com análise de líquido folicular bovino mostraram que a análise pelo método proposto (HPLC-MS/MS) apresentou uma linearidade com coeficiente de regressão maior que 0,99 para ambos os metabólitos propostos. Os limites de quantificação (LOQ) foram de 2.5 pg.mL-1 para os metabólitos AFMK e AMK, 5 pg.mL-1 para melatonina e 12.5 pg.mL-1 para 6HMEL e NAS, respectivamente. Os limites de detecção (LOD) foram de 0,75 pg.mL-1 para os metabólitos AFMK e AMK, 1,5 pg.mL-1 para melatonina e 3,75 pg.mL-1 para 6HMEL e NAS, respectivamente. Esses dados proporcionam o início da compreensão dos padrões fisiológicos da melatonina e de seus metabólitos em líquido folicular bovino e nos permite a questionar a atuação da melatonina em experimentos in vitro como na maturação oocitária. Esses dados ainda nos permitem delinear o possível mecanismo e suas interações da melatonina e de seus metabólitos frente às variadas condições de estresse e tentar elucidar os possíveis mecanismos desempenhados por esses compostos no sucesso do sucesso da produção in vitro de embriões bovinos.