Estudo do mecanismo de sinalização do NAADP na via autofágica regulada pela mTOR (mammalian Target of Rapamycin) em astrócitos

Resumo

A autofagia inicia-se com o isolamento de porções do citosol e/ou organelas por uma dupla membrana, formando o autofagossomo. Este sofre maturação em um processo que envolve a entrega do autofagossomo e seu conteúdo aos lisossomos, originando o autolisossomo, permitindo, então, a digestão de porções do citosol e/ou organelas danificadas contido no mesmo pelas hidrolases lisossomais. O ácido nicotínico adenina dinucleotídeo fosfato (NAADP) tem sido reportado como um importante mobilizador de Ca2+ intracelular, porém seu modo de ação está em discussão. Estudos mais recentes mostraram que as proteínas da família dos canais Two-Pore Channels (TPCs) podem estar em membranas endolisossomais atuando como possíveis receptores do NAADP. A interação de NAADP com os TPCs pode levar à liberação de Ca2+ estocado em organelas ácidas. Mais recentemente, mostramos que a possível ação do NAADP é associada com a modulação da autofagia e que quando em associação com inibidores da atividade da mTOR, indicou uma possível interação entre a sinalização celular do NAADP e da mTOR. Assim, evidencias indicam a participação desse novo segundo mensageiro intracelular no inicio da via autofágico (pela atuação na mTOR) e na finalização (pela modulação da p62). O mecanismo pelo qual o NAADP regula a autofagia ainda precisa ser mais bem estudado. Assim, esse trabalho objetiva principalmente investigar as vias intracelulares de sinalização celular autofágicas mediadas pelo NAADP em astrócitos de ratos, bem como a sua participação na via autofágica da mTOR. Para tanto, serão utilizadas metodologias como microscopia confocal, citometria de fluxo e técnicas de biologia molecular para estudar a expressão de genes e proteínas das vias de sinalização da autofagia. (AU)