Caracterização microbiana e imunológica de lesões endo-periodontais

Resumo

Apesar de existir uma extensa literatura quanto à microbiota associada a lesões periodontais, e a lesões endodônticas separadamente, poucos estudos se dedicaram a investigação da microbiota de lesões combinadas, ou seja, de lesões endo-periodontais (LEP). Os objetivos do presente estudo são: 1) Detectar a presença, os níveis e as proporções de espécies bacterianas de referência em canais radiculares (CR) e bolsas periodontais (BP) de dentes com LEP; 2) Analisar o perfil microbiológico de amostras coletadas do CR e BP; 3) Investigar e quantificar a presença de endotoxinas (LPS) no CR e BP; 4) Quantificar citocinas pró-inflamatórias IL-1² e TNF-± no CR e BP; 5) Correlacionar microrganismos (MO) específicos, níveis de endotoxinas e citocinas com os aspectos clínicos e radiográficos dos dentes envolvidos. Foram selecionados 15 pacientes com dentes com polpas necrosadas, lesões periapicais e BP associadas, caracterizando o envolvimento endo-periodontal. Amostras foram coletadas com cones de papel estéreis/ apirogênicos dos CR e BP e congeladas para futuras análises. Os MO destes 2 sítios serão identificados através de técnicas moleculares (Nested PCR e Checkerboard) e a diversidade microbiana e a abundância relativa dos MO encontrados serão investigadas através do sequenciamento das amostras utilizando a plataforma MiSeq Illumina. A quantificação de endotoxinas em ambos os sítios será realizada através do método de LAL e a quantificação de citocinas pró-inflamatórias através de ELISA. Antes da análise estatística, os dados obtidos com sequenciamento serão avaliados com a "pipeline" QIIME. Todos os resultados obtidos, assim como os aspectos clínicos e radiográficos dos dentes envolvidos, serão tabulados em Excel e posteriormente analisados estatisticamente por softwares específicos. (AU)