Influência da exposição à Porphyromonas gingivalis sobre o fenótipo mesenquimal indiferenciado de células isoladas a partir do ligamento periodontal de humanos

Resumo

A regeneração dos tecidos periodontais de suporte perdidos em decorrência da doença periodontal inflamatória depende da migração e proliferação das células mesenquimais indiferenciadas do ligamento periodontal (PDLMSCs) remanescente, acompanhada pela subsequente diferenciação em osteoblastos, cementoblastos e fibroblastos, e síntese de componentes da matriz extracelular. Tem sido sugerido que, as estruturas periodontais remanescentes, as quais foram expostas ao processo inflamatório crônico, teriam a sua habilidade para promover a regeneração tecidual comprometida. Uma das hipóteses baseia-se no fato das PDLMSCs sofrerem alterações fenotípicas devido à ação das toxinas bacterianas e das citocinas inflamatórias, comprometendo assim, as suas propriedades biológicas. Para testar essa hipótese, PDLMSCs serão expostas ao extrato total da bactéria Porphyromonas gingivalis (Pg), e avaliadas quanto à conservação do fenótipo mesenquimal indiferenciado, capacidade proliferativa e diferenciação em fenótipo osteoblástico/cementoblástico. Inicialmente, 3 populações de PDLMSCs (células CD105+ CD34- CD45-) serão expostas a diferentes concentrações do extrato da Pg (0, 100 ng, 1 µg, 10 µg, 20 µg/ml) e avaliadas quanto a viabilidade celular (ensaio de MTS) e expressão dos genes para IL1B, IL6 e TNFa (qRT-PCR), a fim de determinar a concentração bacteriana não-citotóxica e que induz uma resposta pró-inflamatória mais significativa. Em seguida, as PDLMSCs serão cultivadas ou não na presença do extrato bacteriano e avaliadas quanto: a) expressão dos genes envolvidos na sinalização via Toll-like receptors (PCR array); b) expressão dos marcadores relacionados ao fenótipo mesenquimal indiferenciado (STRO1, CD105 e CD166) e condição de apoptose/necrose (marcadores Annexin V e iodeto de propídio) pela técnica da citometria de fluxo; c) plasticidade celular determinada pela capacidade de diferenciação osteoblástica/cementoblástica através do ensaio de formação de nódulos minerais (coloração de vermelho de alizarina) e expressão dos genes para RUNX2, fosfatase alcalina (ALP) e osteocalcina (OCN) por meio de qRT-PCR. (AU)