Capacidade de um scaffold a base de quistosana na indução de diferenciação odontogênica de cultura de células pulpares

Resumo

A busca por biomateriais que promovam a regeneração do tecido pulpar tem sido alvo de pesquisas na área da engenharia tecidual. A investigação sobre os scaffolds, matrizes formadas por polímeros naturais ou sintéticos, visam promover a restituição do tecido que sofreu agressão. A quitosana, um polímero natural, tem sido avaliada quanto a sua capacidade bioestimuladora e reparadora, tendo potencialidades para uso como scalffods na regeneração pulpar. Diante disto, este estudo tem o objetivo de avaliar o comportamento de uma cultura primária de células extraídas da polpa dental humana e cultura imortalizada de células MDPC-23 (Mouse Dental Papilla Cells) cultivadas em um scaffold contendo quitosana (50% em peso) associada ao polibutileno succinato (PBS). Estes scaffolds serão produzidos por meio da ligação de fibra, utilizando a quitosana desacetilada em 80%, com 8,0 mm de diâmetro e 1,0 mm de espessura. A cultura primária extraída da polpa dental humana será realizada por meio da remoção do tecido pulpar de pré-molares hígidos removidos devido à razões ortodônticas. Após os procedimentos de cultivo e expansão da cultura primária e das células MDPC-23, estas serão semeadas em uma densidade de 2,5 x105 cél/scaffold e mantidas por 24 h em meio de cultura DMEM adicionado de 10% de soro fetal bovino, a 37 °C e 5% de CO2. Em seguida, será inserido meio de cultura para diferenciação osteogênica, sendo trocado a cada 72 horas até a realização dos testes propostos. Será avaliada a capacidade de produção de nódulos de mineralização, utilizando a metodologia do Alizarin Red e quantificação de fosfatase alcalina, por meio da conversão do p-nitrofenol. Será determinada também a expressão gênica, por meio da técnica de q-PCR, de sialoproteína da dentina (DSPP) e proteína da matriz dentinária (DMP-1). A análise da morfologia celular e dos scaffolds será feita pela microscopia eletrônica de varredura. Os testes (n=4) serão realizados em períodos determinados (7,14, 21 e 28 dias), sendo o scaffold experimental comparado ao controle, contendo apenas PBS. Para todos os experimentos, a seleção dos testes estatísticos será baseada nas características dos conjunto de dados de cada variável, como aderência a curva normal e homocedasticidade. Todas as inferências estatísticas serão feitas considerando-se o nível de significância de 5%. (AU)