Avaliação do consumo de lipídios oxidados na indução do estresse oxidativo associado à aterosclerose em modelo animal

Resumo

Estudos envolvendo cultura de células, animais e humanos tem sido extensivamente aplicado no monitoramento da aterosclerose, visando seu controle ou mesmo regressão. Entre os modelos animais atualmente utilizados, tem-se observado uma resposta adequada à indução de dislipidemia e inflamação, porém elevada resistência à indução de estresse oxidativo. Essa limitação metodológica tem sido superada através de intervenções mais agressivas e muitas vezes sem correspondência com o modelo humano, tais como exposição à radiação, aplicação de CCl4 e manipulação genética. Portanto, o objetivo deste estudo será de alterar um modelo animal de referência para desenvolvimento de aterosclerose, visando elevar a variação conjunta de biomarcadores de estresse oxidativo, inflamação e dislipidemia, principalmente através do consumo crônico de ácidos graxos polinsaturados parcialmente oxidados, naturalmente presentes na dieta humana. Camundongos knockout para receptores LDL (C57BL/6), foram divididos em 5 grupos experimentais. Um grupo recebeu dieta regular contendo 4% de lipídios (CONT-), enquanto os outros quatro grupos receberam uma dieta hiperlipídica modificada (Hyper) composta por 30% de lipídios. Três níveis de oxidação foram induzidos no óleo, representando neste estudo um nível baixo, moderado e elevado, caracterizados por uma concentração de hidroperóxidos de 2,47 ± 0,02 (Hyper_L), 3,87 ± 0,04 (Hyper_M) e 4,69 ± 0,04 meq/L (Hyper_H), respectivamente. Um quinto grupo recebeu a dieta Hyper_L, além da indução de diabetes através de estreptozotocina (CONT+). O óleo de linhaça pré-oxidado utilizado no preparo das rações foi mantido a 4oC. A peletização das rações alterou a concentração dos marcadores primários e secundários (p<0.05), porém de forma proporcional, mantendo assim a diferença entre os três níveis. Após 90 dias de intervenção, os animais foram sacrificados, sendo o sangue coletado através de punção cardíaca para determinação do perfil lipídico. Fígado, cérebro, coração e tecido adiposo foram separados, pesados e imediatamente congelados em nitrogênio para análises posteriores. Os seguintes biomarcadores serão a seguir determinados: colesterol total e frações em plasma (dislipidemia); malondialdeído, ácidos graxos, atividade e expressão de enzimas antioxidantes no tecido hepático (estresse oxidativo); ácidos graxos no tecido adiposo (estresse oxidativo), esteatose hepática (inflamação) e quantificação de placa aterosclerótica no arco da aorta (aterosclerose).