Análise do potencial terapêutico da proteína recombinante humana RSPO1 na regeneração de intestino delgado em modelo animal utilizando tecnologias de Engenharia tecidual

Resumo

R-Espondina (RSPO) constitui uma família de proteínas conhecida por induzir a via de WNT, que desempenha papéis fundamentais e diversificados na proliferação, diferenciação, migração e morte celular durante a embriogênese e no adulto. Em particular, os genes RSPO são expressos em vários centros de sinalização conhecidos por seus papéis críticos durante o desenvolvimento, regulando diversos processos tecido específicos como a formação óssea, a proliferação de células ² do pâncreas e células-tronco intestinais, e estão associados a diversos tipos de câncer. A expressão e o funcionamento inadequados das RSPOs e da via de WNT podem levar a diversos quadros patológicos, ficando evidente o potencial terapêutico que estas proteínas podem ter no tratamento de diversas doenças. A atividade mitogênica da proteína RSPO1 em células-tronco intestinais pode oferecer diversas oportunidades terapêuticas. Dada a importância das R-Espondinas para a manutenção do nicho de células-tronco da cripta do intestino delgado, neste trabalho propõe-se gerar clones superprodutores da proteína humana RSPO1 recombinante em células de mamífero CHO-dhfr-/- utilizando-se o vetor pNU1, através de técnicas de Engenharia Genética, visando obter um produto proteico purificado, caracterizado e biologicamente ativo, para utilização em terapia celular na regeneração de intestino, juntamente com outros fatores peptídicos. Para avaliar a atividade de rhRSPO1 na regeneração tecidual, essa será utilizada individualmente ou em conjunto com outros fatores peptídicos de crescimento recombinantes como VEGF e PDGF-BB, na cultura de unidades organoides intestinais murinas, em testes funcionais em modelo de intestino curto engenheirado (TESI), utilizando-se camundongos receptores NOD/SCID. Até o momento, a sequência codificadora do gene hRSPO1 foi sintetizada e subclonada no vetor de expressão pNU1 que será utilizado para transfecção nas células alvo. (AU)