Desenvolvimento de fase monolítica com grupos amino e com adição de nanopartículas para a determinação de carbidopa, levodopa, benserazida, dopamina e 3-O-metildopa em amostras de plasma de pacientes com a Doença de Parkinson por MEPS/HILIC-MS/MS

Resumo

A Doença de Parkinson (DP) é uma doença neurodegenerativa, idiopática, que afeta no Brasil cerca de 3% da população com mais de 65 anos, podendo manifestar-se também em indivíduos com menos de 40 anos (Parkisonismo Precoce). A DP é causada pela deficiência do neurotransmissor, dopamina, na via nigroestriatal e cortical, interferindo principalmente no sistema motor. A levodopa é um pró-fármaco (descarboxilada pelo aminoácido aromático descarboxilase em dopamina) que apresenta a maior eficácia para o controle dos sintomas da DP. A levodopa (LD) tem sido associada à inibidor da dopa descarboxilase periférica, tais como a carbidopa ou benserazida, pois aumenta a disponibilidade da LD no sistema nervoso central e diminui os efeitos adversos da dopamina formada no sistema periférico. O tratamento prolongado da DP com a LD pode levar a flutuações do rendimento motor e discinesias, ou seja, a diminuição da eficácia do LD. A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em tandem (LC-MS/MS) tem sido considerada a técnica analítica de referência para a determinação de fármacos em fluidos biológicos. Já a cromatografia líquida com interação hidrofílica (HILIC) é um modo alternativo da LC-MS/MS em fase reserva para a determinação de substâncias polares. A etapa de preparo de amostras tem sido requerida no desenvolvimento de métodos LC-MS/MS, para eliminar os interferentes e pré-concentrar os fármacos, quase sempre presentes em níveis de traços em amostras biológicas. A microextração em sorvente empacotado (MEPS) é baseada na miniaturização do sistema de extração em fase sólida (SPE), onde os volumes da amostra biológica e do solvente (eluente) foram reduzidos de mililitros para microlitros. Na MEPS, uma microcoluna recheada com material sólido poroso é conectada à agulha de uma microsseringa, ou seja, integrada à microsseringa, como um plug com filtros polietileno em ambos os lados. Neste projeto, um capilar de sílica fundida com fase monolítica de sílica híbrida com grupos amino e com adição de nanopartículas será desenvolvido e utilizado como agulha da técnica MEPS. O método MEPS/HILIC-MS/MS será padronizado e validado para a determinação de carbidopa, levodopa, dopamina, 3-O-metildopa e benserazida em amostras de plasma de pacientes com a doença de Parkinson. As concentrações plasmáticas de levodopa, 3-O-metil-dopa, dos fármacos inibidores da dopamina-descarboxilase periférica (carbidopa e benserazida) e dopamina serão determinadas em pacientes com a doença de Parkinson em tratamento prolongado com a levodopa/carbidopa ou levodopa/benserazida com os sintomas de flutuações motoras (wearing-off) e discinesias. Este estudo auxiliará no ajuste das doses destes pacientes. (AU)