Efeito protetor de inibidores de acetilcolinesterase em resposta a estímulos neurotóxicos e ao estresse oxidativo induzidos pelo peptídeo b-amiloide em linhagens neuronais SH-SY5Y e ACBRI-371

Resumo

A Doença de Alzheimer (DA), caracterizada pela perda progressiva de memória episódica, é uma enfermidade cerebral relacionada à agregação do peptídeo B-amiloide (AB) em placas senis e fosforilação anormal da proteína tau, ocasionando a formação de emaranhados neurofibrilares no cérebro e, portanto, perda de função colinérgica do sistema nervoso central. É bem conhecido que o comprometimento desta função devido à neurotoxicidade AB contribui significativamente para o declínio cognitivo associado à AD. Os inibidores da enzima acetilcolinesterase (AChE), como os fármacos tacrina e donepezil, são os principais medicamentos utilizados na clínica para o tratamento da DA. Entretanto, há uma grande necessidade da síntese de novas moléculas, uma vez que os medicamentos já em uso pelos pacientes apresentam alta toxicidade hepática, comprovada na literatura, além de diversos efeitos secundários (tais como náusea, vômito e diarreia) devido à ação nos tecidos periféricos. Deste modo, torna-se extremamente necessária a obtenção de moléculas de alta eficiência e que sejam de baixo risco e desprovidos de efeitos colaterais aos pacientes. Portanto, a hipótese do presente projeto baseia-se no estudo de compostos híbridos de donepezila-tacrina inibidores da AChE, sintetizados com base na estrutura tridimensional da mesma. Resultados recentes indicaram uma potencial atividade destes compostos com relação à inibição da AChE e A²-agregação, bem como atividade anti-oxidante e de neuroproteção, adicionalmente à capacidade de induzir neurodiferenciação na linhagem neuronal SH-SY5Y (Chierrito et al., Eur J Med Chem. 2017 Oct 20;139:773-791). O objetivo do presente projeto é avaliar a capacidade de neuroproteção de novas moléculas denominadas TA8Amino, TA7E3 e TAHB3, inibidoras da enzima acetilcolinesterase (AChEI) nas linhagens neuronais SH-SY5Y e ACBRI-371, sob condições de tratamentos neurotóxicos e estresse oxidativo induzidos pelo peptídeo AB (1-42). Nesse contexto, serão realizados ensaios de viabilidade celular, sobrevivência clonogênica, morte e ciclo celular para avaliação da citotoxicidade em resposta aos tratamentos empregados. Serão também avaliados marcadores moleculares (tais como, B-III-tubulina, MAP2 e pNF-M) de diferenciação das células SH-SY5Y em neurônios maduros; além disso, serão avaliadas outras alterações: disfunção mitocondrial, produção de espécies reativas de oxigênio (ROS), potencial de membrana, morfologia e massa mitocondrial. Será também analisada a capacidade de os compostos AChEI atuarem no sentido de proteger as células contra danos genotóxicos causados pelo peptídeo AB (1-42), o que será avaliado pelos ensaios do micronúcleo e cometa. Uma vez que estudos preliminares indicam uma promissora atividade de neuroproteção dos compostos AChEI, há expectativa de que o presente estudo possa gerar informações relevantes sobre o potencial dessas moléculas como novos fármacos para o tratamento de pacientes com a DA. (AU)