Abordagens moleculares integradas para elucidar associações ecológicas de Triatoma brasiliensis: fontes alimentares, microbiota e diversidade de Trypanosoma cruzi

Resumo

Nas zonas semiáridas do Brasil, Triatoma brasiliensis é o mais importante vetor da Doença de Chagas. Este triatomíneo encontra-se envolvido em uma complexa trama ecoepidemiológica por ocupar distintos ambientes, como o silvestre, peridomiciliar e domiciliar. Antes do advento do sequenciamento de nova geração, as técnicas moleculares disponíveis para acessar as associações ecológicas de triatomíneos apresentavam limitações para o reconhecimento da diversidade dos organismos associados ao vetor. Assim, este projeto visa aplicar uma abordagem molecular integrativa via metabarcoding para (i) caracterizar as fontes alimentares de T. brasiliensis; (ii) reconhecer a microbiota bacteriana intestinal deste vetor e (iii) a diversidade do Trypanosoma cruzi albergado por T. brasiliensis. Será utilizado o DNA extraído do tubo digestivo de populações de insetos provenientes dos três ambientes onde a espécie pode ser encontrada no estado do Rio Grande do Norte. Para o reconhecimento dos hospedeiros e da comunidade bacteriana da microbiota intestinal serão analisadas as sequências do gene 16S do rRNA presentes no intestino dos insetos com iniciadores específicos para cada grupo. Para o reconhecimento da diversidade do T. cruzi será realizado PCR multiplex com iniciadores para a região do miniéxon deste parasita. O protocolo utilizando metabarcoding apresenta uma maior sensibilidade se comparado com as abordagens moleculares convencionais para detectar, por exemplo, múltiplos repastos sanguíneos nos insetos, bem como infecções multiclonais por T. cruzi. A análise integrada dos resultados poderá possibilitar a avaliação de interações ecológicas que se combinam para moldar a transmissão do parasita. (AU)