Investigação dos requerimentos estruturais para o reconhecimento pela proteína VirD4 de toxinas secretadas pelo sistema de secreção do tipo IV.

Resumo

O VirD4 é uma ATPase que seleciona proteínas a serem secretadas pela maioria dos T4SSs. Nós mostramos que VirD4 de Xanthomonas citri reconhece domínios conservados chamados XVIPCD encontrados no C-terminal de toxinas (X-Tfes) secretadas (Alegria et al., 2005). Estamos interessados em entender a estrutura do complexo VirD4-XVIPCD, como o complexo é transferido para o resto da maquinaria do T4SS e a natureza do papel desempenhado pela ligação e / ou hidrólise do ATP. Como a transferência de toxinas pelo X. citri T4SS mata as células receptoras de E. coli, produziremos uma linhagem X. citri na qual todos os genes que codificam para X-Tfes (XVIPS) foram eliminados. Esta cepa "não assassina", com um T4SS de outro modo funcional, será transformada com plasmídeos expressando X-Tfes específicos. Se isto for bem sucedido, este ensaio pode ser usado para medir quantitativamente a transferência de X-Tfes modificadas com mutações em motivos de reconhecimento específicos. Esta cepa X. citri também será usada para rastrear mutações em outros componentes do T4SS para mapear os requisitos estruturais para a secreção.