Fator de despolimerização de actina (NcADF): oxidação como regulador da atividade de NcADF na morte celular programada de Neospora caninum

Resumo

Neospora caninum (Nc) é um parasita intracelular obrigatório pertencente ao Filo Apicomplexa e agente etiológico da neosporose, doença responsável por causar abortos em bovinos. O prejuízo causado à indústria da pecuária, associado à ausência de tratamentos disponíveis para essa parasitose de interesse veterinário destaca Nc como um importante alvo de investigação com finalidade de desenvolvimento de estratégias de controle da neosporose. A busca por alvos terapêuticos para o desenvolvimento dessas estratégias pode se beneficiar do estudo de mecanismos moleculares específicos de sobrevivência e disseminação desses parasitas. Proteínas da família ADF/cofilina têm se revelado versáteis em suas funções celulares. Conhecidas por sua modulação na dinâmica de actina, ADF/cofilinas são reguladas por alguns fatores, dentre eles a oxidação. Uma vez oxidadas, cofilinas medeiam a apoptose em células de mamíferos por translocação dessas proteínas para mitocôndrias, seguida de liberação de citocromo c. No entanto, a conservação desse mecanismo em protozoários é desconhecida. A apoptose, como uma das formas de morte celular programada, tem sido alvo de investigação em parasitas protozoários nos últimos anos devido à sua característica peculiar, quando comparada a apoptose de metazoários. Desse modo, o objetivo deste projeto é investigar o papel da oxidação como fator regulador da atividade de ADF de N. caninum (NcADF) e avaliar a associação dessa regulação com vias similares a apoptose nesse parasita. A oxidação será avaliada pelo uso de N-clorotaurina (TnCl), substância de conhecida ação antimicrobiana, naturalmente produzida por neutrófilos estimulados. Como sua ação não é conhecida em parasitas apicomplexas, TnCl terá, inicialmente, seu papel em taquizoítas de Nc avaliado por investigações de potencial de geração de estresse oxidativo e indução da morte celular programada. Em paralelo, os resíduos oxidados serão investigados em NcADF recombinante após ação de TnCl e o papel de NcADF oxidada será determinada na dinâmica de actina. Por fim, NcADF oxidada terá sua capacidade de translocação para mitocôndrias de Nc avaliada. A confirmação da hipótese de que NcADF oxidada participa da morte celular programada de Nc pode contribuir significativamente para a geração de conhecimento sobre processos celulares determinantes para sobrevivência do parasita, visando a geração de futuras estratégias de intervenção terapêutica. (AU)