Uso das técnicas de transcriptoma, exoma e expressão gênica para elucidar diferentes fenótipos de distúrbios da diferenciação do sexo em pacientes 46,xy

Resumo

As condições que apresentam desenvolvimento genital e/ou gonadal incompleto ou desordenado levando a uma discordância entre o sexo genético, gonadal e fenotípico do indivíduo afetado são classificadas como Distúrbios da Diferenciação do Sexo (DDS). São conhecidos diversos genes que atuam nas vias da determinação e diferenciação do sexo, como por exemplo: WT1, SRY, NR5A1, DMRT1, SOX9, GATA4, NR0B1, HAM, AR, SRD5A2, HSD17B3, entre outros. Entretanto, após a triagem em busca de mutações nesses genes, algumas questões importantes se apresentam: nos casos em que variantes foram encontradas, qual o efeito biológico que estas exercem e quais seriam suas reais influencias nos fenótipos? Na tentativa de abordar essas questões frente aos resultados de estudos anteriores, propomos este projeto que será dividido três partes. A primeira será analisar o transcriptoma de material de biopsia de pacientes que apresentam mutações em dois receptores nucleares (AR e NR5A1), a fim de averiguar como estas alterações afetam a regulação de genes, causando um possível desequilíbrio no padrão de expressão genica, e correlacionar os efeitos observados com os diferentes fenótipos apresentados pelos pacientes. Nos casos de mutações no NR5A1, o sequenciamento do exoma (WES) será realizado para procurar por uma segunda variante patogênica que possa explicar os diferentes fenótipos apresentados pelos pacientes. Por último, estudos in vitro por expressão de gene reporter também serão realizados a fim de averiguar o impacto funcional dessas variantes. As análises de bioinformática provenientes dos dados gerados pelo RNA-seq e WES serão realizadas em colaboração com o grupo Medical Systems Biology, enquanto que, os estudos in vitro serão realizados no Department of Pediatric and Adolescent Medicine, Division of Pediatric Endocrinology and Diabetes, ambos na Universidade de Lübeck. O Professor Dr. Olaf Hiort, que será o supervisor responsável, é um dos mais conceituados pesquisadores na área de DDS da Europa. Outros experientes profissionais também irão auxiliar a candidata durante o estágio no exterior, o Professor Dr. Hauke Busch, com as análises de transcriptoma e exoma e Dr. Ralf Werner, com os estudos funcionais. Este trabalho poderá contribuir para uma melhor compreensão dos mecanismos moleculares que possam explicar o fenótipo dos pacientes, bem como, servira para implementar os estudos de exomas e transcriptomas em nosso laboratório. (AU)