Uso das técnicas de transcriptoma, exoma e expressão gênica para elucidar diferentes fenótipos de distúrbios da diferenciação do sexo em pacientes 46,xy

• Processo: 18/19445-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Vigência (Início): 01 de maio de 2019
• Vigência (Término): 31 de março de 2024
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Gil Guerra Júnior
• Beneficiário: Helena Fabbri Scallet
• Instituição Sede: Centro de Biologia Molecular e Engenharia Genética (CBMEG). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 20/13421-8 - Uso das técnicas de transcriptoma, exoma e expressão gênica para elucidar diferentes fenótipos de distúrbios da diferenciação do sexo em pacientes 46,xy, BE.EP.PD
• Assunto(s): Endocrinologia pediátrica Exoma
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: distúrbios da diferenciação do sexo | exoma | trascriptoma | Endocrinologia Pediátrica

Resumo

As condições que apresentam desenvolvimento genital e/ou gonadal incompleto ou desordenado levando a uma discordância entre o sexo genético, gonadal e fenotípico do indivíduo afetado são classificadas como Distúrbios da Diferenciação do Sexo (DDS). São conhecidos diversos genes que atuam nas vias da determinação e diferenciação do sexo, como por exemplo: WT1, SRY, NR5A1, DMRT1, SOX9, GATA4, NR0B1, HAM, RA, SRD5A2, HSD17B3, entre outros. Entretanto, após a triagem em busca de mutações nesses genes, duas questões importantes se apresentam. A primeira delas diz respeito aos casos em que mutações são identificadas. Nesses casos o desafio principal é investigar o efeito biológico que estas exercem e quais seriam suas reais influências nos fenótipos. A segunda questão a ser enfrentada é que através do sequenciamento gene a gene, cerca de 60-70% dos casos permanecem com etiologia indefinida. Na tentativa de abordar essas duas questões frente aos resultados de estudos anteriores, propomos este projeto que será dividido em duas partes. A primeira será analisar a função gênica in vitro por expressão de gene repórter e in vivo através do transcriptoma de material de biópsia de pacientes que apresentam mutações em dois receptores nucleares (RA e NR5A1), a fim de averiguar como estas alterações afetam a regulação de genes, causando um possível desequilíbrio no padrão de expressão gênica, e correlacionar os efeitos observados com os diferentes fenótipos apresentados pelos pacientes. Para tal, serão realizados estudos in vitro de transfecção em células de mamíferos, além de RNA-seq e PCR Real Time, com RNA obtido a partir das gônadas ou tecido genital dos pacientes. A segunda parte, visa analisar por sequenciamento de exoma, 10 pacientes classificados como DDS 46,XY idiopáticos, com o intuito de identificar a presença de variantes patogênicas e, eventualmente, revelar novos genes envolvidos na diferenciação testicular. Dessa maneira, este trabalho poderá contribuir para uma melhor compreensão dos mecanismos moleculares que possam explicar o fenótipo dos pacientes, bem como, servirá para implementar os estudos de exomas e transcriptomas em nosso laboratório.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

FABBRI-SCALLET, HELENA; WERNER, RALF; GUARAGNA, MARA S.; DE ANDRADE, JULIANA G. R.; MACIEL-GUERRA, ANDREA T.; HORNIG, NADINE C.; HIORT, OLAF; GUERRA-JUNIOR, GIL; DE MELLO, MARICILDA P.. Can Non-Coding NR5A1 Gene Variants Explain Phenotypes of Disorders of Sex Development?. SEXUAL DEVELOPMENT, v. N/A, p. 9-pg., 2022-06-28. (13/05603-5, 13/24333-9, 18/19445-6)

DE OLIVEIRA, FELIPE RODRIGUES; MAZZOLA, TAIS NITSCH; DE MELLO, MARICILDA PALANDI; FRANCESE-SANTOS, ANA PAULA; DE LEMOS-MARINI, SOFIA HELENA V.; MACIEL-GUERRA, ANDREA TREVAS; HIORT, OLAF; WERNER, RALF; GUERRA-JUNIOR, GIL; FABBRI-SCALLET, HELENA. DHX37 and NR5A1 Variants Identified in Patients with 46,XY Partial Gonadal Dysgenesis. LIFE-BASEL, v. 13, n. 5, p. 11-pg., 2023-04-27. (18/19445-6, 15/04763-4, 20/01054-0)

FABBRI-SCALLET, HELENA; DE SOUSA, LIZANDRA MAIA; MACIEL-GUERRA, ANDREA TREVAS; GUERRA-JUNIOR, GIL; DE MELLO, MARICILDA PALANDI. Mutation update for the NR5A1 gene involved in DSD and infertility. Human mutation, v. 41, n. 1, p. 58-68, JAN 2020. (15/04763-4, 18/19445-6, 13/05603-5)