Produção de anticorpos policlonais anti-KLK14

Resumo

O Carcinoma de cabeça e pescoço (HNSCC) é um tipo de Câncer de alta incidência de tratamento desafiador. Assim, urge-se a descoberta de novos alvos terapêuticos para melhor tratamento e, portanto, maior qualidade de vida ao paciente. As calicreínas (KLKs) são serino proteases relacionadas a processos fisiológicos, como a descamação epitelial, e processos patológicos, como as neoplasias malignas. Um estudo recente do nosso laboratório mostrou que a expressão da calicreína 5 (KLK5), em relação ao seu inibidor, lympho-epithelial Kazal-type inhibitor (LEKTI), é uma importante ferramenta para implementar o diagnóstico histopatológico do HNSCC. Entre outros alvos, a KLK5 é capaz de clivar e ativar a calicreína 14 (KLK14). Desta forma, em continuação aos estudos do nosso grupo de pesquisa, investiga-se a relação da KLK14 em tumores malignos. Importante mencionar que a KLK14 está superexpressa em vários tipos de cânceres, como próstata, mama, ovário e testículo. Com este objetivo, faz-se necessário o desenvolvimento de metodologia específica para avaliar a expressão da KLK14 nos tecidos. O emprego dos anticorpos baseia-se na reação de alta especificidade entre antígeno e anticorpo, o que justifica seu importante uso em ensaios bioquímicos, nas áreas de pesquisa e diagnóstico. A produção de anticorpos mostra-se como uma ferramenta fundamental para o estudo pioneiro do papel da KLK14 em Carcinomas. Sendo a produção de soro imune de coelhos uma alternativa. Este projeto propõe-se a desenvolver três anticorpos policlonais: (I) anti-KLK14 murina, produzida a partir da proteína KLK14 murina inteira; (II) anti-KLK14 murina, produzida a partir de um fragmento da proteína KLK14 murina; e (III) anti-KLK14 humana, produzida a partir da proteína KLK14 humana inteira. Metodologicamente, a produção dos anticorpos anti-KLK14 supramencionados acontecerá de acordo com as seguintes etapas: (I) clonagem do DNA em vetor pGEX4T-1; (II) obtenção da proteína KLK14 inteira ou fragmento; e (III) imunização dos coelhos para produção do soro imune. Finalmente, este projeto justifica-se pela ausência de anticorpos específicos disponíveis no mercado aliada à necessidade de estudo da KLK14 no contexto dos HNSCC. As calicreínas (KLKs) são proteínas localizadas extracelularmente e, portanto, alvos terapêuticos promissores para o desenvolvimento de terapias para esta doença incrivelmente desafiadora.(AU)