Papel da osteoprotegerina na modulação in vitro de monócitos por células de papila apical

• Processo: 20/12726-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2024
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Carla Renata Sipert
• Beneficiário: Carla Renata Sipert
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FO). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Cristina Cunha Villar ; Fernando Neves Nogueira ; Maria Helena Raposo Fernandes ; Marinella Holzhausen Caldeira ; Rui de Albuquerque Carvalho
• Assunto(s): Biologia oral Reabsorção óssea Osteoclastogênese Células-tronco da polpa dentária Monócitos Apoptose Movimento celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: apoptose | Células de papila apical | migração celular | monócitos | Osteoclastogênese | Reabsorção óssea periapical | Biologia Oral

Resumo

Reabsorção de tecidos mineralizados é um evento biológico presente em patologias orais desafiadoras como doença periodontal, periodontite apical e reabsorção radicular externa. O papel de células mesenquimais na modulação do metabolismo ósseo já é conhecido, mas não o papel de células da papila apical neste contexto especialmente por meio do efeito de osteprotegerina (OPG). O objetivo deste estudo é investigar o papel de OPG produzida por células-tronco da papila apical (SCAP) na apoptose, migração e diferenciação de monócitos in vitro. Cultura primária de SCAP será estabelecida e as células serão submetidas ao silenciamento de OPG por transfecção lipossomal (SCAP-OPG KD ou SCAP-scr KD como controle negativo). O sobrenadante será coletado para validação do silenciamento por meio da quantificação de OPG além da detecção de outros fatores envolvidos com apoptose como TRAIL e interleucina (IL)-33 ou com migração celular como CCL2. Além disso, também será detectado o ligante de receptor de fator nuclear kappa B (RANKL). Com base nestes achados, serão preparados meios condicionados e estocados. Monócitos de sangue periférico serão isolados a partir de indivíduos saudáveis e colocados em cultura. Estas células serão tratadas com os meios condicionados de SCAP-OPG KD ou SCAP-scr KD e serão investigados quanto à viabilidade celular e apoptose na presença ou não de anticorpos neutralizadores de TRAIL e IL-33. Para migração celular, o meio condicionado será utilizado em conjunto com anticorpo neutralizante de CCL2. Por fim, os monócitos serão induzidos à diferenciação em osteoclastos com adição de M-CSF e RANKL na presença do meio condicionado de SCAP-OPG KD ou SCAP-scr KD por 21 dias. A avaliação da diferenciação em osteoclastos será feita por meio da análise de anéis de actina, detecção de fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) e catepsina K, atividade de TRAP e consumo de glicose e produção de lactato. SCAP serão imunomarcadas para RANKL nas membranas celulares e em seguida serão co-cultivadas com monócitos CD14+ por 14 dias. TRAP, catepsina K e RANKL serão avaliados por imunofluorescência bem como atividade de TRAP. Os dados serão analisados estatisticamente com base no padrão de normalidade de sua distribuição. Valores de p serão considerados significativos a 5%. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SANTOS, LETICIA MARTINS; CARDOSO, PATRICIA E SILVA; DINIZ, ELISA ABREU; RAHHAL, JULIANA GARUBA; SIPERT, CARLA RENATA. Different concentrations of fetal bovine serum affect cytokine modulation in Lipopolysaccharide- activated apical papilla cells in vitro. Journal of Applied Oral Science, v. 31, p. 9-pg., 2023-01-01. (20/12726-0)