Efeito dos aminoácidos de cadeia ramificada na modulação da resposta inflamatória induzida por LPS em células intestinais Caco-2

• Processo: 21/02060-7
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2024
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Nutrição - Bioquímica da Nutrição
• Pesquisador responsável: Marcelo Macedo Rogero
• Beneficiário: Marcelo Macedo Rogero
• Instituição Sede: Faculdade de Saúde Pública (FSP). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Elizabeth Aparecida Ferraz da Silva Torres ; Geni Rodrigues Sampaio ; Ricardo Ambrósio Fock
• Assunto(s): Nutrigenômica Inflamação Mucosa intestinal Aminoácidos de cadeia ramificada Células CACO-2 Lipopolissacarídeos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aminoácidos de cadeia ramificada | Células Caco-2 | epitélio intestinal | Inflamação | Lipopolissacarídeo | Genômica Nutricional

Resumo

A inflamação é um fator presente na fisiopatologia de doenças agudas e crônicas, e, o intestino, órgão susceptível a disfunções e à disbiose, que está em constante exposição a microrganismos, pode estar associado a este processo. Por outro lado, aminoácidos de cadeia ramificada (ACR) podem apresentar efeitos anti-inflamatórios e antioxidantes em linhagem celular intestinal. Objetivos: Investigar os efeitos in vitro dos ACR na modulação da resposta inflamatória induzida por lipopolissacarídeo (LPS) em modelo de células intestinais Caco-2. Métodos: As células Caco-2 serão cultivadas e armazenadas em garrafas e placas de expressão (n = 6) até atingirem a confluência de 80%. As culturas de células serão distribuídas em seis grupos, sendo: dois grupos controle - controle com meio Dulbecco's Modified Eagle's Medium sem ACR (DMEM-0) e com ACR (DMEM-P) -, grupo leucina (LEU), grupo isoleucina (ISO), grupo valina (VAL) e associação de ACR (LIV). Será adotado um protocolo de pré-tratamento (PT), com os ACR e o LPS. A dosagem de citocinas inflamatórias (IL-1beta, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-alfa) será realizada por meio do método de ELISA. A análise de proteínas (mTOR, AKT, AMPK, NF-5B, TAK-1, IKK-beta, JNK e IkB-alfa) será feita por Western Blotting. Serão avaliados componentes do sistema antioxidante relacionado à glutationa (GSH, GSSH, GPx) por meio de kit comercial. Para as análises estatísticas, será realizada a análise de variância one-way, seguida do teste post hoc de Tukey. Os resultados serão apresentados na forma de média ± desvio padrão e será considerado p < 0,05. Resultados esperados: Espera-se compreender os potenciais mecanismos de ação de ACR - de forma isolada e associados entre si - no que concerne à modulação da resposta inflamatória induzida por LPS. Acredita-se que estes aminoácidos modularão proteínas da via inflamatória por meio de modelo experimental em células Caco-2. (AU)