Caracterização de precursores biossintéticos de âncoras glicosilfosfatidilinositol em Trypanosoma cruzi

• Processo: 94/03670-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 1994
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2000
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Maria Lucia Cardoso de Almeida
• Beneficiário: Maria Lucia Cardoso de Almeida
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Trypanosoma cruzi
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Ancora Gpi | Biossintese In Vitro | Precursor Biossintetico | Trypanosoma Cruzi

Resumo

O objetivo a longo prazo de nosso grupo de pesquisa é caracterizar a rota Biosintética de GPI em Trypanosoma cruzi visando encontrar pontos de ataque para quimioterapia racionalmente planejada. Uma vez que a sobrevida e continuidade do ciclo biológico deste parasita dependem de componentes de superfície, e que a maioria destes é ancorada na membrana via glicosilfosfatidilinositol (GPI), interferência no seu metabolismo pode vir a representar uma alternativa quimioterápica promissora. Visando atingir esta meta foi possível nos últimos 4 anos: (i) padronizar condições de diferenciação reprodutíveis que permitissem a obtenção de formas tripomastigotas metacíclicas em quantidade e que, em fazendo uso de meio definido preparado em nosso laboratório, facilitasse a incorporação Biosintética de diferentes açúcares, aminoácidos e lipídios; (ii) estudar condições de inibição das fosfolipases endógenas que permitissem purificação de proteínas ancoradas por GPI intactas, i.e., na sua forma anfifílica; (iii) definir totalmente a estrutura do GPI da proteína majoritária de metacíclicos de meio axênico (1G7-antígeno) incluindo sua porção lipídica e suspeitada heterogeneidade. Esta meta visou paralelamente introduzir em nosso laboratório a metodologia necessária para tais estudos através de ativo intercâmbio com o Dr. Michael Ferguson da Universidade de Dundee, Escócia; (iv) estabelecer condições de marcação metabólica utilizando componentes da âncora radiomarcados e analisá-los enquanto parte das âncoras de proteína e em glicolipídios; Nos próximos 2 anos os objetivos primordiais do presente projeto são: (i) identificar e caracterizar o glicolipídio precursor da âncora do 1G7-Ag baseado nas propriedades previstas a partir da estrutura da âncora previamente definida; (ii) confirmar se em analogia a T. brucei existiria uma molécula tipo glicolipídio C em T. cruzi conforme evidências experimentais preliminares parecem indicar; (iii) desenvolver para T. cruzi um sistema de biossíntese de GPI in vitro, livre de células, para permitir estudos mais refinados da rota Biosintética; (iv) definir se as âncoras tipo ceramida-GPI presentes no abundante LPPG e em pequena proporção do 1G7-Ag são obtidas por remodelagem das estruturas glicerolipídicas ou por via Biosintética completamente dissociada, em outras palavras, qual a relação Biosintética das âncoras tipo ceramida-PI e alquil-acil-PI em T. cruzi. Pretende-se, na medida do possível, estender os estudos feitos com formas de inseto (epimastigotos e metacíclicos) para tripomastigotas de cultura. (AU)