Alterações em Células Tumorais Circulantes e Endoteliais: O Papel do Estresse de Cisalhamento e das Vesículas Extracelulares nas Interações Celulares

• Processo: 25/00135-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2028
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Vanessa Morais Freitas
• Beneficiário: Vanessa Morais Freitas
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Neoplasias mamárias Células endoteliais Células neoplásicas circulantes Vesículas extracelulares Biologia tumoral
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Câncer de mama | células endoteliais | Células tumorais circulantes | estresse de cisalhamento | junções célula-célula | vesículas extracelulares | Biologia Tumoral

Resumo

O câncer de mama é o tipo de tumor mais comum entre as mulheres, sendo o subtipo triplo negativo (TNBC) o mais agressivo, associado a altas taxas de mortalidade e menor sobrevida em casos metastáticos. A metástase ocorre pelo espalhamento do tumor através da circulação, envolvendo processos como intravasamento e extravasamento de células tumorais através do endotélio. Estudos sugerem que vesículas extracelulares (EVs), liberadas pelas células tumorais, desempenham um papel crucial no preparo do nicho metastático. Essas EVs modulam o microambiente tumoral, aumentando a permeabilidade das células endoteliais (ECs) e permitindo que células tumorais atravessem as junções entre essas células. Além disso, o fluxo sanguíneo exerce um estresse de cisalhamento (FSS, do inglês fluid shear stress), que influencia a adesão e o extravasamento das células tumorais.Dados preliminares do nosso grupo mostraram que pequenas EVs (sEVs) derivadas de células TNBC se acumulam sobre as junções célula-célula de células endoteliais de veia umbilical humana (HUVEC) sob FSS. Além disso, análises de espectrometria de massa comparando células endoteliais em condições estáticas e sob FSS identificaram um grupo de proteínas, presentes na membrana plasmática e em junções célula-célula, que são mais abundantes em células submetidas ao FSS. O objetivo deste estudo é identificar as proteínas de junção célula-célula que interagem com sEVs tumorais e investigar como essa interação afeta a adesão de células tumorais circulantes (CTCs) na monocamada de ECs sob FSS.Para isso, células HUVEC serão tratadas com sEVs tumorais, e as proteínas de superfície celular, incluindo aquelas que se ligaram às sEVs, serão biotiniladas para evitar contaminação com vesículas do sistema endossômico-lisossômico presentes no citoplasma. Em seguida, os lisados celulares serão purificados em colunas de estreptavidina-agarose, e as proteínas associadas ao CD63 serão co-imunoprecipitadas, com análise posterior por Western blot e/ou espectrometria de massa. Adicionalmente, ensaios de microfluídica serão realizados para avaliar a adesão, extravasamento e viabilidade de células tumorais circulantes em ECs tratadas ou não com sEVs.Os resultados esperados devem complementar os estudos anteriores do grupo, elucidando um mecanismo inovador pelo qual as sEVs modulam a permeabilidade vascular e promovem a metástase em TNBC. Esses achados podem abrir novas perspectivas para o desenvolvimento de terapias focadas na inibição dessa interação e no bloqueio do preparo do sítio metastático. (AU)