Protocolo otimizado de extração de proteínas a partir de amostras de pele humana

• Processo: 25/10347-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2026
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia
• Pesquisador responsável: Gil Benard
• Beneficiário: Gil Benard
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Espectrometria de massas Proteínas Proteômica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: human skin | mass spectrometry | proteins | Proteomics | Sporotrichosis | Micologia, Proteômica, Esporotricose

Resumo

A pele é o maior órgão do corpo e o local de um conjunto diversificado de doenças. No entanto, dada a complexidade do tecido cutâneo, há uma disponibilidade limitada de dados na literatura sobre proteômica da pele. Aqui, propusemos um protocolo adaptado e otimizado para a extração de proteínas da pele humana, usando uma combinação de abordagens de lise química e mecânica. Para isso, usamos um tampão de lise contendo 2% de SDS, 50 mM de TEAB e um coquetel de inibidores de protease e fosfatase a 1%, além de esferas Matrix A e um homogeneizador FastPrep-24 5G. Para a caracterização das amostras, as proteínas obtidas foram purificadas e digeridas usando o método SP3 (preparação de amostra em fase sólida em vaso único) e analisadas por nano cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em tandem (nanoLC-ESI-MS/MS). Dessa forma, conseguimos identificar cerca de 6.000 proteínas nas amostras de pele de indivíduos saudáveis e pacientes com a infecção fúngica esporotricose. Nossa metodologia aprimorada pode enriquecer significativamente nossa compreensão da biologia da pele e fornecer novas perspectivas para a descoberta de biomarcadores e alvos terapêuticos para doenças cutâneas. (AU)