Resumo
Os desenvolvimentos da pesquisa genômica revelam a importância da coordenação e análise da vasta informação acumulada com vistas à biologia e evolução dos organismos estudados. Em Leishmania o desenvolvimento da pesquisa genômica promete tomar-se um instrumento fundamental para a busca de métodos eficientes de tratamento e prevenção da leishmaniose, uma doença de importância epidemiológica indiscutível. O projeto genoma de Leishmania vem acumulando informações acerca da estrutura e organização deste genoma e se concentra agora no seqüenciamento. Os primeiros delineamentos de estratégias de análise funcional começam a aparecer. É importante ressaltar que os estudos de seqüências e estruturas do genoma e, mais recentemente, a tônica funcional devem estar permeados pela preocupação com as particularidades genéticas desse organismo. E sob este prisma que nasce a proposta temática aqui apresentada. A ênfase estará na determinação de seqüência e caracterização de estruturas do genoma ressaltando a relevância fenotípica da informação gerada. Os objetivos principais foram divididos em seis subprojetos. Em um deles, nossa proposta é a determinação da seqüência completa do cromossoma 2 deste parasita, corno parte do consórcio internacional de seqüenciamento do genoma de L. major. Nesta direção estaremos utilizando, como estratégia de apoio ao seqüenciamento, o sistema mariner de transposição in vitro. Além de contribuir no seqüenciamento, os transposons serão utilizados no desenvolvimento de uma estratégia de nocaute sistemático de genes neste mesmo cromossomo. Devido à características do sistema de transposição de que dispomos, os alvos para nocaute serão seqüências efetivamente expressas no parasita, portanto temos um sistema com dupla função: gerar fragmentos apropriados para nocautes aleatórios e funcionar como 'armadilha de genes'. A análise molecular das seqüências centroméricas de Leishmania é importante para entender a estrutura do centrômero enquanto elemento fundamental para a segregação dos cromossomos. A localização de seqüências que estabilizem e permitam a segregação durante o processo de mitose vem sendo conduzida em nosso laboratório através da transfecção de clones gênicos de bibliotecas construídas em vetores lineares. Selecionamos clones que apresentam dinâmica de manutenção sugestiva de presença de seqüências centroméricas, e estes clones serão analisados funcionalmente, procurando delimitar o elemento centromérico e estabelecer, a seguir, a distribuição destes elementos ao longo dos cromossomos em Leishmania. Em nossos estudos sobre a região telomérica selecionamos 3 clones provenientes de 3 extremidades cromossômicas distintas. O perfil de transcrição dessas regiões foi delineado através do uso de transfectantes contendo cada um dos clones teloméricos... (AU)
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