Miniexon e virulencia em leishmania major.

Resumo

O presente projeto visa estudar os mecanismos envolvidos no fenômeno de atenuação da virulência observado por Antoniazi e col., em projeto desenvolvido neste laboratório, que mostrou que a super-expressão do gene miniexon de Leishmania major, envolvido no processo de "trans-splicing", atenua o padrão da infecção de linhagens originalmente virulentas em camundongos BALB/c "in vivo". Conduziremos estudos comparativos entre as linhagens atenuada e parental virulenta através da caracterização do perfil de proteínas total nas diferentes linhagens e posterior identificação das proteínas diferendalmente expressas. Também avaliaremos comparativamente as populações\de RNA (poliadenilado ou não) presentes nestes transfectantes e os transcritos de interesse serão caracterizados. Outro objetivo contemplado neste projeto é a construção de um vetor "shuttle" que se integre, por recombinação homóloga, no lócus do rDNA, cujo promotor, reconhecido pela RNA polimerase I (Pol I), induz alta taxa de transcrição constitutivamente. Diferentes versões do recombinante serão construídas, nas quais variantes do gene miniexon serão inseridas no contexto cromossômico com o intuito de gerar linhagens atenuadas estáveis, com uso potencial para o desenvolvimento de uma vadna segura contra a leishmaniose. As possíveis alterações moleculares induzidas pela superexpressão das diferentes versões do miniexon serão avaliadas após transfecção em Leishmania. (AU)