Imunotriagem de genes de interesse de Carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus por meio da estratégia de imunologia reversa para descoberta de antígenos e desenvolvimento de uma vacina anti-carrapatos

• Processo: 06/04149-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2009
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Medicina Veterinária Preventiva
• Pesquisador responsável: Beatriz Rossetti Ferreira
• Beneficiário: Beatriz Rossetti Ferreira
• Instituição Sede: Escola de Enfermagem de Ribeirão Preto (EERP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Município da Instituição Sede: Ribeirão Preto
• Assunto(s): Parasitose animal Carrapatos Imunologia veterinária Vacinas Saliva Clonagem RNA mensageiro Citocinas Bovinos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bovinos | carrapatos | Imunidade | Rhipicephalus microplus | transcriptomas | vacina gênica | Vacinas

Resumo

Carrapatos são parasitas de importância veterinária mundial que prejudicam a produção de carne, leite e couro, reduzindo significativamente a produtividade do setor pecuário. O controle é feito com agentes químicos, tóxicos para o homem e o meio ambiente. Atualmente existem duas vacinas anti-carrapatos disponíveis que, em tese, seriam métodos de controle sustentáveis. No entanto, seu desempenho está aquém do necessário, talvez devido a antígenos mal selecionados. O Laboratório de Imunoparasitologia da FMRP/USP estuda transcriptomas de R. microplus para acelerar a descoberta de novos antígenos, tendo identificado 200 clones que codificam genes de interesse (GIs) completos relacionados a proteínas salivares secretadas. A saliva de carrapatos é alvo importante da resposta imune porque neutraliza a resposta homeostática do hospedeiro. Este projeto empregará 20-40 dos 200 GIs candidatos numa imunotriagem in vitro e in vivo buscando identificar genes relacionados a proteínas que induzam resposta de hipersensibilidade cutânea tardia (DTH) e proliferação de linfócitos T em bovinos previamente infestados, resistentes ou suscetíveis ao carrapato (imunologia reversa). Nas triagens in vivo, os genes serão reclonados em vetor (TOPO VR2001) que permite clonagem TA rápida e entrega de antígenos na forma de DNA plasmideal com forte expressão das proteínas codificadas e secreção para o meio extracelular. Será ainda realizada a histologia e investigação de mRNA para citocinas inflamatórias das biópsias cutâneas cuja reações mostrarem-se positivas (DTH positivas). Na imunotriagem in vitro, células dendríticas bovinas diferenciadas in vitro serão transformadas com os GIs, sendo em seguida, medida sua capacidade de ativar células T CD4+ (produção de IFN-g; e linfoproliferação). Entre os GIs triados, aqueles que forem capazes de induzir resposta serão empregados em testes de proteção contra infestações. O desempenho alimentar e reprodutivo dos carrapatos alimentados em animais imunizados e controles indicará os antígenos protetores. (AU)

Patente(s) depositada(s) como resultado deste projeto de pesquisa