Expressao da pkr, rax, atf4 e micro-rnas na retinopatia diabetica experimental

• Processo: 08/58325-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2009
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2011
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Fernando Luiz de Lucca
• Beneficiário: Fernando Luiz de Lucca
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Diabetes mellitus Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Apoptose Neuronal | Diabetes Mellitus | Expressao Genica | Micro-Rna | Pkr

Resumo

Os mecanismos moleculares responsáveis pela retinopatia diabética não foram ainda totalmente elucidados. Estudos recentes revelaram que a apoptose de neurônios ocorre nas fases iniciais da retinopatia diabética e que as alterações neuronais precedem as complicações vasculares na retina. É fato conhecido que o estresse do retículo endoplasmático (RE) induz apoptose neuronal e que a PKR é uma das proteínas pró-apoptóticas produzidas durante o estresse do RE. Outra proteína induzida durante o estresse do RE é o RAX que atua com um ativador da PKR. Por outro lado, a ativação da PKR resulta na fosforilação do elF2a e na tradução seletiva do RNAm do fator de transcrição ATF4 e consequentemente na transcrição de genes apoptóticos. Recentemente, verificou-se que RNAs não codificadores denominados de micro-RNAs (miRNAs), regulam a expressão gênica em nível pós-transcricional. Já foi demonstrado que a expressão de miRNAs está alterada em várias patologias humanas. Este estudo utilizará a retina de ratos tratados com estreptozotocina como modelo de retinopatia diabética, pois as alterações patológicas são semelhantes àquelas observadas na retina de pacientes diabéticos. Os principais objetivos deste trabalho são: 1. Investigar a expressão da PKR. RAX e ATF4 na retina de ratos normais e diabéticos através de RT-PCR em tempo real e Western blot; 2. Avaliar o nível de fosforilação do eIF2a na retina de ratos normais e diabéticos por Western blot, usando o anticorpo anti-phospo-elF2a ; 3. Quantificar a apoptose de neurônios da retina através do método TUNEL; 4. Identificar os miRNAs que tem como alvos potenciais os RNA mensageiros da PKR e RAX através de análise in silico; 5. Investigar a expressão de miRNAs, cujos alvos PKR e RAX foram identificados por análise computacional, na retina de ratos normais e diabéticos; 6. Validar os alvos preditos (PKR e RAX) de miRNAs através do ensaio de luciferase; 7. Verificar a distribuição de miRNAs nas células da retina de ratos normais e diabéticos através de hibridização in situ. Este estudo poderá contribuir para elucidar os mecanismos moleculares responsáveis pela apoptose de neurônios da retina de ratos diabéticos e para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas da retinopatia diabética. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SILVA, VIVIANE ALINE OLIVEIRA; ANDRE, NAYARA DELGADO; SOUSA, THAIS AMARAL; ALVES, VANI MARIA; DO CARMO KETTELHUT, ISIS; DE LUCCA, FERNANDO LUIZ. Nuclear PKR in retinal neurons in the early stage of diabetic retinopathy in streptozotocin-induced diabetic rats. MOLECULAR MEDICINE REPORTS, v. 24, n. 2, AUG 2021. (08/58325-4)

SILVA‚ V.A.O.; POLESSKAYA‚ A.; SOUSA‚ T.A.; CORRÊA‚ V.M.A.; ANDRÉ‚ N.D.; REIS‚ R.I.; KETTELHUT‚ I.C.; HAREL-BELLAN‚ A.; DE LUCCA‚ F.L.. Expression and cellular localization of microRNA-29b and RAX‚ an activator of the RNA-dependent protein kinase (PKR)‚ in the retina of streptozotocin-induced diabetic rats. MOLECULAR VISION, v. 17, p. 2228, 2011. (08/50294-2, 08/58325-4)

SILVA, VIVIANE A. O.; POLESSKAYA, ANNA; SOUSA, THAIS A.; CORREA, VANI M. A.; ANDRE, NAYARA DELGADO; REIS, ROSANA I.; KETTELHUT, ISIS C.; HAREL-BELLAN, ANNICK; DE LUCCA, FERNANDO L.. Expression and cellular localization of microRNA-29b and RAX, an activator of the RNA-dependent protein kinase (PKR), in the retina of streptozotocin-induced diabetic rats. MOLECULAR VISION, v. 17, n. 241-43, p. 2228-2240, AUG 18 2011. (08/50294-2, 08/58325-4)