Estudos de imunização e moleculares sobre o Vírus Respiratório Sincicial Humano

• Processo: 09/17587-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2012
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia
• Pesquisador responsável: Armando Morais Ventura
• Beneficiário: Armando Morais Ventura
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Expressão de proteínas Vacinas de DNA Interação proteína-proteína Vírus sincicial respiratório humano Purificação de proteínas Virologia Imunidade celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Expressão de proteínas | Hrsv | Imunidade Celular | interação entre proteínas | Purificação de Proteínas | Vacina de DNA | Virologia

Resumo

O vírus Sincicial Respiratório Humano (HRSV) é um patógeno importante principalmente em crianças e prevalente globalmente. O desenvolvimento de uma vacina efetiva contra o HRSV ainda não foi possível, havendo também muito a ser compreendido sobre sua interação com o hospedeiro. Em trabalhos anteriores clonamos e expressamos vários genes do HRSV em diferentes vetores, e verificamos que para obter um bom nível de expressão é necessário otimizar os genes virais retirando sinais que bloqueiam a transcrição nuclear. Em continuidade, propomos utilizar os genes otimizados das proteínas virais M, N e P, já obtidos, como vacinas de DNA. É nosso objetivo também, utilizar várias proteínas virais que expressamos em bactérias como imunógenos. A proteína M foi expressa no vetor pET, e as proteínas N e P no pMAL. Subclonamos a seqüencia codificadora de um peptídeo da glicoproteína G do envelope viral, que concentra epítopos importantes, isolada ou em fusão com o gene da subunidade B da toxina colérica. Almejamos também ampliar o painel de epítopos de células T caracterizados para HRSV, e da proteína L verificamos que dois epítopos induziram resposta celular significativa em camundongos. Propomos neste projeto finalizar essa caracterização e juntar a esses epítopos os já descritos na literatura, compondo uma vacina de DNA no formato de minigene. Além dos estudos de imunização, a expressão eficiente dos genes otimizados de M, N e P, nos permitiu a realização de uma série de experimentos de localização intracelular e de imunoprecipitação, e o estudo da interação dessas proteínas virais com proteínas celulares. Assim, outro objetivo é de continuar essa abordagem, explorando detalhes da replicação e potenciais alvos de intervenção antiviral. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

OLIVEIRA, ANDRESSA P.; SIMABUCO, FERNANDO M.; TAMURA, RODRIGO E.; GUERRERO, MANUEL C.; RIBEIRO, PAULO G. G.; LIBERMANN, TOWIA A.; ZERBINI, LUIZ F.; VENTURA, ARMANDO M.. Human respiratory syncytial virus N, P and M protein interactions in HEK-293T cells. VIRUS RESEARCH, v. 177, n. 1, p. 108-112, OCT 2013. (09/17587-9)

MEDINA-ARMENTEROS, YORDANKA; FARINHA-ARCIERI, LUIS E.; BRAGA, CATARINA J. M.; CARROMEU, CASSIANO; TAMURA, RODRIGO E.; VENTURA, ARMANDO M.. Mapping of CD8 T Cell Epitopes in Human Respiratory Syncytial Virus L Protein. Intervirology, v. 57, n. 2, 2014. (09/17587-9)