Screening for specific proteasome inhibitors followed by the determination of proapoptotic and antitumoral properties in cell culture.

• Processo: 04/07636-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Programa BIOTA - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2004
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2006
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Pesquisador responsável: Marilene Demasi
• Beneficiário: Marilene Demasi
• Instituição Sede: Instituto Butantan. São Paulo , SP, Brasil
• Município da Instituição Sede: São Paulo
• Bolsa(s) vinculada(s): 05/01372-2 - Bioprospeccao dentre compostos de origem natural de inibidores especificos do proteassoma 20s seguida da determinacao de atividade pro-apoptotica e anti-tumoral em cultura de celulas tumorais., BP.TT
• Assunto(s): Bioquímica orgânica Produtos naturais Antineoplásicos Complexo de endopeptidases do proteassoma Apoptose
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antitumorais | Apoptose | Produtos Naturais | Proteassoma | Proteolise

Resumo

Os inibidores do proteassoma promovem morte celular em células de mamíferos por processo descrito, em muitos casos (dependendo de linhagem celular e dose), como apoptose. Esta atividade por parte de inibidores específicos da protease tem sido explorada como potencialmente benéfica na quimioterapia de diversos tumores incluindo-se os sólidos e hematológicos. Com destaque na literatura científica recente está o inibidor sintético denominado de bortezomibe prestes a ser introduzido na clínica médica. Outra evidência do potencial terapêutico desses inibidores são os trabalhos que vêm sendo publicados em anos recentes sobre a busca por esses compostos dentre produtos de origem natural, além da pesquisa química de inúmeros novos compostos sintéticos. A presente proposta de trabalho tem por objetivo identificar dentre os produtos naturais disponibilizados pelo programa BIOTA, compostos que sejam inibidores específicos do proteassoma. A metodologia a ser utilizada implica em microensaios e prevê o screening mensal de centenas de extratos e/ou derivados isolados. Consistirá na medida da atividade do proteassoma na presença desses produtos por intermédio de ensaios em microplacas, sendo que o proteassoma será isolado de uma linhagem de S. cerevisiae onde uma das subunidades do complexo catalítico 20S é modificada com uma cauda de poli-histidina o que permite a purificação do complexo 20S em poucas horas. A segunda fase do projeto prevê o estudo da especificidade dos inibidores potenciais encontrados na primeira etapa. A especificidade dos inibidores será avaliada por meio de ensaios de imunoprecipitação e de cinética enzimática. Após a identificação e seleção dos inibi dores específicos do proteassoma, será feita avaliação da atividade pró-apoptótica desses compostos. Os ensaios nessa fase do projeto serão realizados em cultura de células tumorais de diversas linhagens onde será avaliada a viabilidade celular e feita a caracterização do processo apoptótico por meio de ensaios já consolidados na literatura... (AU)