Isolamento e caracterização de transcritos sexo-específicos em peixes utilizando a técnica de DDRT-PCR (differential display reverse transcriptase): modelo inicial para implementação de linha de pesquisa em expressão gênica diferencial

• Processo: 03/06761-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2003
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2006
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Animal
• Pesquisador responsável: Adriane Pinto Wasko
• Beneficiário: Adriane Pinto Wasko
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 04/10024-5 - Isolamento e caracterizacao de transcritos sexo-especificos em leporinus macrocephalus (pisces, characiformes) utilizando a tecnica de ddrt-pcr ("diferential display reverse transcriptase ..., BP.DR; 04/10911-1 - Identificacao de marcadores rapd sexo-especificos e dnas satelites em brycon cephalus (pisces, bryconinae): contribuicoes a caracterizacao genetica da especie., BP.IC; 04/10328-4 - Identificacao de marcadores sexo-expecificos em leporinus macrocephalus (pisces, anostomidae) utilizando a tecnica de rapd., BP.IC; 03/11702-4 - Isolamento e caracterização de transcritos sexo-específicos em peixes utilizando a técnica de DDRT-PCR (Differential Display Reverse Transcriptase): modelo inicial para implementação de linha de pesquisa em expressão gênica diferencial, BP.JP
• Assunto(s): Expressão gênica Diferenciação sexual (núcleo celular) Peixes
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cdna | Ddrt-Pcr | Diferenciacao Sexual | Display Diferencial | Expressao Genica | Peixes
• Publicação FAPESP: https://media.fapesp.br/bv/uploads/pdfs/Investindo...pesquisadores_161_141_141.pdf

Resumo

O Departamento de Morfologia do Instituto de Biociências da UNESP-Botucatu possui diversas linhas de pesquisa nas áreas de biologia celular e molecular, histologia e embriologia que, entre outros, incluem estudos sobre efeitos de substâncias cancerígenas e de drogas, biologia da reprodução e do desenvolvimento, determinação e diferenciação sexual, citogenética, genética evolutiva e molecular, identificação e caracterização de proteínas contráteis e histofisiologia e histopatologia dos aparelhos reprodutores feminino e masculino. Embora várias metodologias sejam utilizadas para o desenvolvimento destes estudos, tecnologias de expressão gênica diferencial ainda não são aplicadas e mostram-se extremamente importante para sua complementação, fortificação e atualização. Nos últimos anos, diversas metodologias que permitem a identificação de transcritos diferencialmente expressos, ou seja, genes expressos como RNAs mensageiros para síntese de proteínas e que diferem em abundância entre diferentes amostras, vêm sendo descritas. Entre estas, a técnica de 'display' diferencial (DO) representa uma metodologia relativamente simples e de baixo custo que constitui um modelo adequado para a implementação de estudos de expressão gênica diferencial - através de transcrição reversa de RNA utilizando um 'primer' ancorador, seguida de reação em cadeia da polimerase (PCR) do DNA complementar utilizando um 'primer' arbitrário, diferenças de expressão gênica entre amostras distintas podem ser visualizadas através de eletroforese em gel de poliacrilamida. Como objeto inicial de estudos em expressão gênica diferencial utilizando a técnica de 'display' diferencial, a espécie Leporinus macrocephalus, peixe de grande importância econômica para a pesca e para a piscicultura nacional e que apresenta um sistema cromossômico de determinação sexual do tipo ZZ/ZW, foi selecionada para a identificação e caracterização de transcritos sexo-específicos. Os resultados configurarão dados extremamente importantes para a compreensão da origem e evolução dos mecanismos de determinação e diferenciação sexual em peixes e, de uma forma geral, em vertebrados. (AU)