LC-MS/MS quantitation of plasma progesterone in cattle

• Processo: 11/09111-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2011
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Ed Hoffmann Madureira
• Beneficiário: Ed Hoffmann Madureira
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Radioimunoensaio Cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas Progesterona Biotecnologia da reprodução Bovinos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bovino | Lc-Ms | Ms | progesterona | radioimunoensaio | sincronização de estro | Biotecnologia da Reprodução

Resumo

A quantificação de progesterona (P4) em fluídos biológicos é frequentemente realizada por meio de radioimunoensaios (RIA), mas o uso da a técnica de cromatrografia líquida acoplada à espetrometria de massas sequencial (LC-MS/MS) é ainda pouco difundido. Devido à sua natureza auto-confirmatória, a técnica de LC-MS/MS minimiza de forma significativa a ocorrência de falsos-positivos e interferências. Neste trabalho, a técnica de RIA foi comparada a um protocolo de extração rápido, eficiente e de baixo custo para quantificação de P¬4 em plasma bovino por LC-MS/MS sem utilização de derivatização de amostras. Como modelo de avaliação, foram comparadas as quantidades de P4 plasmáticas liberadas a partir de três dispositivos comerciais e não-biodegradáveis de liberação intravaginal controlada de P4, introduzidos por 192 h em seis vacas ovariectomizadas. As duas técnicas indicaram cinética simlar de liberação de P4 (P > 0.05). Entretanto, as quantidade de P4 mensuradas por RIA foram consistentementes superiores às quantidades mensuradas por LC-MS/MS (P < 0.05) devido à interferências e efeitos de matriz no RIA. O método de LC-MS/MS foi validado de acordo com as regulamentações analíticas padrões, de forma que o limite de detecção (LOD) e o limite de quantificação (LOQ) foram 0,08 e 0,25 ng mL-1, respectivamente. A alta seletividade do método de LC-MS/MS proposto para a quantificação de P4 elimina os riscos associados à manipulação de isótopos radioativos; e também dispensa a necessidad de derivatização de amostra, a qual é regularmente utilizada em métodos de LC-MS/MS para quantificação de hormônios esteróides. O desenvolvimento de ensaios multi-esteróides é possível, e hipoteziamos que LC-MS/MS se tornará uma técnica de referência para a quantificação de hormônios em estudos de reprodução animal. (AU)