Rapid purification, pro-coagulant and platelet aggregating activities of Rhombeobin (LMR-47), a Thrombin-like/gyroxin enzyme from Lachesis muta rhombeata snake venom

• Processo: 13/14706-2
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2014
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Sergio Marangoni
• Beneficiário: Sergio Marangoni
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Toxicologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Serine proteinase | Toxinología

Resumo

Neste artigo nós informamos um método de purificação rápido que usa um único etapa cromatográfica obtendo a fração de SVSP Rombeobin (LMR-47) de Lachesis muta rhombeata veneno e suas atividades pró-coagulante e efeitos em agregação de plaqueta. O veneno foi fracionado por um único passo cromatográfico em RP-HPLC em um C-8 Discovery® Bio coluna Larga, mostrando grau alto de homogeneidade molecular com massa molecular de 47035.49 Da. Rhombeobin mostrou atividade amidolítica em BApNA, com um pH ótimo entre (7-10) e era estável em solução até 60 °C. A atividade de amidolítica foi inibida por inibidores de proteinase de serina e agentes redutores; mas não para agentes quelantes. Rhombeobin mostrou atividade coagulante alta em protoplasma de ratos e fibrinogênio bovino. A seqüência de aminoácido deduzida de Rhombeobin mostrou homologia com outras SPSV, especialmente com LM-TL (L. m. muta) e Gyroxin (C. d. terificus). Rhombeobin age, em vitro, como uma enzima a favor pró-coagulante forte em protoplasma de ratos, encurtando o APTT e teste de PT de maneira dose-dependente. A proteína mostrou, "ex-vivo ", um efeito defibrigenolítico efetua com 1ug/animal. A mais baixas doses ativou as vias de coagulação intrínseco e extrínseco e prejudica a agregação de plaqueta induzida por PAD. Assim, este é a primeira descrição de um componente de veneno que produzindo um coagulopatia por consumo induzido pelo veneno (VICC). (AU)