TLR2 and TLR4 polymorphisms influences mRNA and protein expression in colorectal cancer

• Processo: 15/02342-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2015
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2015
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Ana Elizabete Silva
• Beneficiário: Ana Elizabete Silva
• Instituição Sede: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Neoplasias Neoplasias colorretais Inflamação Expressão gênica Polimorfismo genético Receptor 2 toll-like Receptor 4 toll-like Expressão de proteínas Publicações de divulgação científica Artigo científico
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: colorectal cancer | gene expression | Genetic Polymorphisms | protein expression | Tlr2 | Tlr4 | Inflamação e câncer

Resumo

Avaliar o efeito de polimorfismos da região promotor TLR2-196 to -174del e TLR4-1607T / C (rs10759932) e a expressão do RNAm e proteínas no tumor e também de TLR4 + 896A /G (rs4986790) e o risco de CRC. O polimorfismo TLR2-196 to -174del foi investigado usando PCR alelo-específico e o TLR4-1607T/C e TLR4 + 896A/G por PCR-RFLP (Reação em Cadeia da Polimerase / Restriction Fragment Length Polymorphism). Foram genotipadas 434 amostras de DNA (194 pacientes CRC / 240 indivíduos saudáveis). A quantificação relativa do RNAm (RQ) foi realizada em 40 amostras de tecido tumoral pelo ensaio TaqMan qPCR, utilizando sondas específicas para os genes de TLR2 e TLR4, e os genes de referência ACTB e GAPDH foram utilizados como controlos endógenos. A expressão de proteínas foi analisada por imuno-histoquímica com anticorpos primários específicos. Não foi encontrada associação para TLR4-1607T / C e TLR4 + 896A / G por três modelos estatísticos (log-aditivo, dominante e recessivo). No entanto, com base nos modelos dominante e log-aditivo, a variante polimórfica TLR2-196 to -174del foi associada com um risco aumentado de CRC [dominante: OR (IC 95%) = 1,72 (1,03-2,89); P = 0,038 e log-aditivo: OR (IC 95%) = 1,59 (1,02-2,48); P = 0,039]. A expressão do RNAm de TLR2 foi maior no tecido tumoral (RQ = 2,36) quando comparada com o tecido normal adjacente (RQ = 1; P <0,0001), enquanto o RNAm de TLR4 mostrou expressão basal (RQ = 0,74 vs RQ = 1; P = 0,452). Análise da expressão das proteínas TLR2 e TLR4 por imuno-histoquímica são concordantes com as da expressão do mRNA. Além disso, os indivíduos portadores da variante TLR2-196 to -174del mostraram expressão relativa do RNAm 2,19 vezes maior do que dos portadores do genótipo selvagem. A expressão da proteína TLR2 também foi maior nos indivíduos portadores do polimorfismo TLR2-196 to -174del (117 ± 10 vs 95 ± au au 4; p = 0,03). No entanto, para o polimorfismo TLR4 -1607T / C não foi encontrada nenhuma diferença significativa tanto para o mRNA (P = 0,56) como para a expressão da proteína (P = 0,26). Nosso estudo sugere que o polimorfismo TLR2-196 to -174del aumenta a expressão do RNAm de TLR2 e está associado a maior risco CRC, indicando um papel importante na susceptibilidade genética do CRC. (AU)