Still Searching for a Suitable Molecular Test to Detect Hidden Plasmodium Infection: A Proposal for Blood Donor Screening in Brazil

• Processo: 16/06320-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2016
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2016
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Saúde Coletiva - Saúde Pública
• Pesquisador responsável: Silvia Maria Fátima Di Santi
• Beneficiário: Silvia Maria Fátima Di Santi
• Instituição Sede: Superintendência de Controle de Endemias (SUCEN). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Técnicas de diagnóstico molecular Reação em cadeia da polimerase em tempo real Malária
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Diagnóstico Molecular | malária | pcr em tempo real | Triagem de doadores de sangue | Malária

Resumo

IntroduçãoEsforços têm sido realizados para estabelecer ferramentas de diagnóstico sensíveis para triagem da malária em bancos de sangue, a fim de detectar portadores assintomáticos. Microscopia, o teste de referência da malária no Brasil, é demorado e sua sensibilidade depende da experiência do microscopista. Embora as ferramentas moleculares estejam disponíveis, alguns aspectos precisam ser considerados para triagem em larga escala: precisão e robustez para a detecção de baixa parasitemia, a acessibilidade para aplicação em grande número de amostras e flexibilidade para executar em amostras individuais ou em pool.MetodologiaNeste estudo retrospectivo, foram avaliados quatro ensaios moleculares para detecção de parasitos da malária em um conjunto de 56 amostras previamente avaliadas por microscopia. Além disso, avaliou-se o efeito de agrupamento de amostras em pool sobre a sensibilidade e especificidade dos ensaios moleculares. Uma amostra de cultura bem caracterizada com um parasito/mL foi incluída em todos os testes avaliados. O DNA foi extraído com Kit DNA QIAamp e eluído em 50 uL para concentrar o DNA. Pools foram montados com 10 amostras cada. Os protocolos moleculares tiveram como alvo o gene 18S rRNA, e incluiu-se uma qPCR gênero específica (Lima-gênero), um duplex qPCR gênero/Pf (PET-gênero, PET-Pf) e um qPCR duplex espécie específico (Rougemont: Roug-Pf/Pv e Roug- Pm/Po). Além disso, um protocolo de nested PCR espécie- específico foi utilizado (Snou-Pf, Snou-Pv, Snou-Pm e Snou-Po).ResultadosO limite de detecção foi de 3,5 p/mL e 0.35p/mL para o PET-gênero e ensaios de Lima-género, respectivamente. Considerando-se as amostras individuais positivas (n=13) e negativas (n=39) de acordo com a microscopia, a sensibilidade dos dois ensaios de qPCR gênero foi de 76,9% (Lima-gênero) e 72,7% (PET-gênero). Lima-gênero e PET-gênero mostraram sensibilidade de 86,7% nas amostras em pool. Os protocolos de gênero obtiveram resultados semelhantes (valor Kappa de 1.000) em ambas as amostras individuais e em pool.ConclusõesEsforços devem ser feitos para melhorar o desempenho de testes moleculares para permitir a detecção de parasitemia com baixa densidade, para que estes testes sejam utilizados para o rastreio de malária em bancos de sangue. (AU)