Utilização de espectrometria de massas e ligação cruzada no estudo de interações proteína-proteína

• Processo: 05/02420-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2006
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Exatas e da Terra - Química
• Pesquisador responsável: Fabio Cesar Gozzo
• Beneficiário: Amadeu Hoshi Iglesias
• Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Espectrometria De Massas | Ligacao Cruzada | Proteina | Bioquímica

Resumo

A espectrometria de massas (MS) é hoje uma ferramenta fundamental na análise e caracterização de proteínas. Dentre as suas vantagens, destacam-se a alta sensibilidade, requerendo quantidades diminutas de material, e a velocidade de análise, permitindo que se tenha um número de análises compatível com a área de proteínas. Dentre as informações que podem ser obtidas por MS de forma rápida, sensível e confiável, pode-se citar a identificação de proteínas, o sequenciamento de peptídeos e a identificação e localização de modificações pós-traducionais. De forma geral, podemos dizer que MS é uma técnica já consolidada para a análise de estruturas primárias (sequência) de proteínas. No entanto, muitas das funções celulares não são conduzidas por proteínas isoladas, mas por complexos constituídos de várias proteínas, como por exemplo, a replicação e reparo de DNA, transcrição do DNA em RNA e a tradução do RNA em proteínas, além de muitos outros exemplos. Desse modo, o mapeamento da interação entre as proteínas se faz fundamental no entendimento dos processos que ocorrem nos sistemas biológicos. Entretanto, uma das grandes dificuldades dessa área consiste na correta caracterização desses sistemas, uma vez que estes apresentam várias particularidades, como por exemplo, a instabilidade, o tempo de vida muito curto e o fato de muitas dessas interações serem de natureza não covalentes (Tang et al, 2005), o que torna esses complexos frágeis sob o ponto de vista da espectrometria de massas.Embora a identificação dos componentes de um complexo proteico seja de fundamental importância (visto que revela a contribuição dos genes na função celular), esta não é suficiente no completo entendimento do complexo. O conhecimento da organização espacial das proteínas e a determinação dos sítios de interação aliados à cinética com que essas interações ocorrem auxiliariam na integração dos resultados obtidos para as proteínas individuais, permitindo um estudo mais aprofundado acerca da real função do complexo como um todo (Rappsilber et al, 2002). Em vista das perspectivas dispostas acima, o presente projeto baseia-se na proposição de uma metodologia que possa permitir a análise de estruturas superiores (terciárias e quaternárias) de proteínas por MS através do uso de ligações cruzadas. Essas ligações cruzadas podem fixar covalentemente às proteínas dentro de um complexo tornando a análise por MS desses complexos muito convenientes. Do ponto de vista biológico, essa metodologia traria todos os benefícios de MS para o campo de estruturas superiores de proteínas e de interação proteína-proteína, enquanto que do ponto de vista de MS, isso traria um novo horizonte para a técnica, ou seja, o estudo de estruturas superiores de proteínas. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

IGLESIAS, Amadeu Hoshi. Utilização de espectrometria de massas, ligação cruzada (cross-linking) e footprinting no estudo de interações proteina-proteina. 2009. Tese de Doutorado - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Química Campinas, SP.