Caracterizacao molecular e avaliacao da resistencia ao virus da tristeza dos citros (ctv) em plantas transgenicas de citrus sinensis cv. valencia

• Processo: 07/01947-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2007
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Agronomia - Fitossanidade
• Pesquisador responsável: Beatriz Madalena Januzzi Mendes
• Beneficiário: Fabiana Rezende Muniz
• Instituição Sede: Centro de Energia Nuclear na Agricultura (CENA). Universidade de São Paulo (USP). Piracicaba , SP, Brasil
• Assunto(s): Resistência à doença Transformação genética
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: ctv | hairpin | transformação genética | Resistência a doenças

Resumo

As frutas cítricas ocupam o primeiro lugar em volume de produção na fruticultura brasileira, com destaque para a produção de laranjas. Apesar disso, a produtividade de citros no país é baixa quando comparada com a produtividade obtida em outros países produtores. Essa baixa produtividade deve-se, entre outros fatores, à ocorrência de pragas e doenças na cultura. Dentre as doenças de grande importância destaca-se a tristeza do citrus, causada pelo Citrus tristeza virus (CTV). Essa doença encontra-se disseminada por todas as regiões produtoras de citros e apresenta, entre os danos mais comuns, caneluras (stem pitting), enfezamento e frutos miúdos em copas suscetíveis, mesmo quando essas são enxertadas em variedades de porta-enxerto tolerantes. O objetivo do trabalho é caracterizar com análise molecular e avaliar a resistência ao CTV de plantas transgênicas de Citrus sinensis cv. Valencia, contendo o gene ou fragmentos do gene da capa protéica dos citrus, em 3 construções gênicas diferentes. Está sendo estudada uma construção gênica contendo uma seqüência de 684 pb do gene da capa protéica no sentido sense, uma construção gênica contendo uma seqüência conservada, de 559 pb, clonada de diferentes isolados do CTV e uma terceira construção gênica do tipo hairpin, contendo uma seqüência de 684 pb do gene da capa protéica no sentido sense e antisense, separadas por um intron. Assim além de avaliar a resistência das plantas ao CTV também iremos verificar a eficiência destes tipos de construção gênica em controlar a multiplicação do vírus nas plantas. A resistência ao CTV será avaliada em 10 linhagens transgênicas, de cada construção gênica. Estas linhagens transgênicas foram produzidas em um projeto anterior e as plantas encontram-se aclimatizadas em condições de casa-de-vegetação. A confirmação da integração e transcrição do transgene será feita pela análise de Southern e Northern blot e as plantas confirmadas como transgênicas serão propagadas por enxertia em porta-enxerto limão 'Cravo'. As plantas enxertadas serão utilizadas nos ensaios de inoculação com o patógeno. A inoculação será realizada por enxertia e com o vetor Toxoptera citricida. A detecção do vírus nas plantas inoculadas será feita pelo teste serológico PTA-ELISA. Os testes de ELISA serão realizados no segundo, sexto e décimo mês após a inoculação com o intuito de avaliar a presença e concentração de vírus no tecido vegetal. As plantas serão consideradas infectadas quando os valores de absorbância a 405 nm forem pelo menos o dobro das plantas controle, não inoculadas.

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

MUNIZ, Fabiana Rezende. Caracterização molecular e avaliação da resistência ao vírus da tristeza dos citros (CTV) em plantas transgênicas de laranja \'Valência\' (Citrus sinensis L. Osbeck). 2009. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALA/BC) Piracicaba.