Engenharia genética de um sistema de expressão duradoura e seletiva do VEGF (fator de crescimento endotelial vascular) para condição isquêmica baseados no sistema integrase ΦC31 e HRE (hypoxia response elemento): nova abordagem de terapia gênica para isquemia de membros

• Processo: 08/52381-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2008
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Sang Won Han
• Beneficiário: Eduardo Gallatti Yasumura
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Terapia genética Hipóxia Fatores de crescimento do endotélio vascular Isquemia Integrases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Hipoxia | Integrase Fi231 | Isquemia De Membro | Plasmidio | Terapia Genica | Vegf

Resumo

A terapia gênica convencional baseada em vetor plasmidial contendo o gene VEGF sob o controle de um promotor constitutivo para a isquemia de membro tem mostrado resultados variáveis, onde em alguns casos há a formação de angioma e em outros casos, pouco ou nenhum efeito terapêutico. Isto se deve à expressão excessiva do VEGF por células sob normóxia e/ou baixa expressão do VEGF por células sob hipóxia, ou seja, a expressão não-otimizada do gene VEGF pelo tecido isquêmico. É compreensível esta situação se pensarmos que um membro isquêmico consista de uma estrutura tridimensional e não bidimensional como ocorre numa cultura de células numa placa, onde o grau de isquemia em cada ponto do membro é variado. Fisiologicamente, deveria ocorrer a expressão de genes angiogênicos em maior proporção pelas células sob isquemia e não pelas células em normóxia. Portanto, é necessário a construção de um novo sistema de expressão gênica (vetor) para o tratamento de isquemia de membros que expressasse genes angiogênicos majoritariamente sob hipóxia por longo tempo e cessasse sob normóxia para se atingir um melhor resultado in vivo. Sendo assim, este o principal objetivo deste projeto. Para alcançar o objetivo, será utilizado o sistema integrase OC31, que é uma enzima codificada pelo fago de Streptomyces, capaz de integrar genes de maneira unidirecional em sítios específicos do genoma humano e murino, promovendo assim uma expressão gênica de longa duração. Para que a expressão seja regulada por isquemia, será testado o elemento de resposta à hipóxia (HRE), que é uma sequência reconhecida pelo HIF-1, o fator pleiotrópico responsável pela expressão de genes angiogênicos em hipóxia. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

YASUMURA, EDUARDO GALLATTI; STILHANO, ROBERTA SESSA; SAMOTO, VIVIAN YOCHIKO; MATSUMOTO, PRISCILA KEIKO; DE CARVALHO, LEONARDO PINTO; VALERO LAPCHIK, VALDEREZ BASTOS; HAN, SANG WON. Treatment of Mouse Limb Ischemia with an Integrative Hypoxia-Responsive Vector Expressing the Vascular Endothelial Growth Factor Gene. PLoS One, v. 7, n. 3, p. e33944, 2012. (11/00859-6, 06/59630-0, 08/52381-0)