Caracterizacao de interacoes proteina-dna em tripanossomas.

• Processo: 09/50488-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2009
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Maria Carolina Quartim Barbosa Elias Sabbaga
• Beneficiário: Ricardo Pariona Llanos
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 05/00154-1 - Identificação das origens e da maquinária de replicação em células de Trypanosoma, AP.JP
• Assunto(s): Replicação
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cdc6 | Orc1 | Origens De Replicacao | Pre-Replicacao | Replicacao | Trypanosomas

Resumo

O objetivo de nosso laboratório é estudar as bases moleculares da replicação de tripanosomas. Em um trabalho submetido para publicação, nós demonstramos que a proteína Orc1/Cdc6 de Trypanosoma cruzi e Trypanosoma brucei é um componente da maquinaria de pré-replicação nestes organismos. Como o papel da maquinaria de pré-replicação é licenciar regiões do DNA como origens de replicação, um dos objetivos deste trabalho é buscar seqüências de DNA que interagem com Orc1/Cdc6 a fim de se conhecer as origens de replicação em tripanosomas. Para tanto, serão realizados ensaios de ChIP, nas formas proliferativas epimastigota de T. cruzi e procíclica de T. brucei, utilizando anticorpos anti-Orc1/Cdc6 e as seqüências de DNA obtidas serão seqüenciadas e analizadas em colaboração como grupo do Dr. Christian Probst (IBMP, Paraná). Além disso, uma análise do genoma de tripanosomas demonstrou que diferente dos demais eucariontes, esses organismos não apresentam o componente da maquinaria de pré-replicação Cdt1. Assim, outro objetivo deste projeto é buscar moléculas que interajam fisicamente com Orc1/Cdc6 a fim de identificar outros componentes da maquinaria de pré-replicação de tripanosomas. Para tanto, serão geradas linhagens da forma proliferativa epimastigota de T. cruzi contendo o gene Orc1/Cdc6 fundido ao epitopo TAG e os extratos celulares/nucleares destas linhagens serão purificados em colunas de afinidade. As moléculas obtidas serão identificadas por espectrometria de massa. Alternativamente, extrato nuclear de T. cruzi (forma epimastigota) e T. brucei (forma procíclica) serão imunoprecipitados com anti-Orc1/Cdc6 e as moléculas ... (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

LLANOS, Ricardo Pariona. Caracterização de interações proteína-DNA em tripanossomas.. 2014. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) São Paulo.